mIHC多色技术在晚期甲状腺癌免疫图谱分析中的应用

本文通过mIHC多重荧光免疫技术和多光谱成像技术(MSI)分析了不同类型晚期甲状腺癌的免疫图谱，通过挖掘肿瘤微环境中的宝贵信息，帮助我们去选择免疫治疗的候选者。 
研究者针对收集的12例伴有远端转移的DTC患者和16例ATC患者的28份组织样本，使用mIHC和MSI评估分析细胞表面因子CD 4、CD8、PD-1、PD-L1、Foxp3和细胞角蛋白CK（图1A），再结合肿瘤比例评分法（TPS）和联合阳性评分法(CPS)评估关键因子PD-L1的表达。 

图1.特征性细胞表面标志物的多光谱图像和表达情况 
（A）代表性晚期甲状腺癌共定位结果；
（B）CD4, CD8, PD-1, PD-L1, Foxp3和CK不同颜色单染以排除交叉反应； 
（C）PD-L1在不同样本中的表达情况，验证mIHC与常规方法的一致性 

结果（图2）显示甲状腺未分化癌ATC组中PD-L1阳性的肿瘤细胞显著多于分化型甲状腺癌DTC组（每平方毫米183.5 vs. 0.03, P < 0.001）。

图2. 基于病理亚型的表达PD-L1的肿瘤细胞数量比较

与DTC组相比，ATC组中淋巴细胞浸润显著增加（1,138 [67.15–2,731] vs. 84.05 [0–300.9], p < 0.05），并且ATC中PD-L1或PD-1阳性淋巴细胞显著多于DTC（图3A）。图3B和图3C则分别表明ATC组中细胞毒性T淋巴细胞（370.7 [38.19–2,327] vs. 18.97 [0.99–169.1] , p < 0.05）和Tregs（263.8 [26.9–1,499] vs. 14.15 [0.34–188.0], p < 0.05）均显著多于DTC组。

图3. DTC和ATC组中T淋巴细胞及其亚型的数量比较

此外，研究者进一步结合肿瘤比例评分法（TPS）和联合阳性评分法(CPS)评估了关键因子PD-L1在不同类型甲状腺癌样本中的表达。TPS和CPS的具体定义如下，PD-L1阳性和高表达的临界值在TPS和CPS中分别为1和50，以及1和20。

结果显示，在所有DTC样本中PD-L1表达的TPS和CPS结果均为阴性，而在ATC样本中阳性占比则分别高达81%和94%（图4），并且PD-L1高表达的比例分别有6%和44%。

本文研究人员主要通过mIHC多色方法评估分析了不同晚期甲状腺癌的免疫图谱，聚焦PD-L1表达及淋巴细胞浸润情况。研究发现相较于伴有远端转移的分化型甲状腺癌DTC组，甲状腺未分化癌ATC组PD-L1阳性更高，并且具有更多PD-1/PD-L1阳性的浸润性淋巴细胞。文章揭示了靶向PD-L1的免疫治疗可能是一种针对甲状腺未分化癌ATC的有效治疗策略。

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