人外周血淋巴细胞绝对计数实验方法与验证

实验样本如何选择与处理？

本实验采用健康人外周血作为样本来源，使用 EDTA 抗凝采血管收集新鲜血液，样本采集后 4 小时内完成处理。实验前将血液样本轻轻颠倒混匀 8-10 次，确保细胞分布均匀，避免局部细胞聚集影响计数准确性。样本处理采用免洗裂红法，可最大程度保留淋巴细胞活性与数量，减少操作过程中的细胞损失。

实验需要准备哪些关键试剂与耗材？

实验核心试剂与耗材均选用爱必信生物高品质产品：绝对计数管（货号：abs9907，规格：50T），预装有精确数量的荧光微球，可直接用于绝对计数；PBS 缓冲液（1×）（货号：abs962，规格：500mL），用于样本稀释与仪器冲洗；红细胞裂解液（1×）（货号：abs9101，规格：100mL），经配方优化，裂解红细胞同时几乎不损伤有核细胞。此外还需 BD 公司补偿微球及 CD3、CD4（APC）、CD8（BV421）、CD45（V500）系列流式抗体。

标准化实验操作流程是怎样的？

采用反向移液技术吸取 50μL 混匀样本，加入绝对计数管底部，移液器前端避免接触管底，防止血液接触管壁上部。在流式管底部加入相应体积流式抗体，轻轻涡旋混匀约 3 秒，室温避光反应 25 分钟。随后加入 450μL 红细胞裂解液，涡旋 15 秒，室温避光反应 10 分钟。免洗处理，轻轻涡旋 10 秒后即可上机检测。该流程操作简便，全程约 40 分钟，适合临床样本快速检测。

实验结果可靠性如何？

我们对 abs9907 绝对计数管的 A、B 两个批次进行了平行验证，结果显示两批次产品的微球计数 CV 值均小于 3%，淋巴细胞亚群绝对计数结果重复性良好，与进口同类产品具有高度一致性。

A批次：

B批次：

实验证明，爱必信绝对计数管性能稳定，可满足临床与科研中淋巴细胞亚群绝对计数的需求。