小鼠小肠组织解离处理步骤

1、断颈法处死小鼠

固定小鼠捏住小鼠尾根部，将小鼠放置在笼盖上，定位颈椎镊子或拇指与食指，紧贴小鼠头后部、两耳连线后方（颈椎第一节位置），牢牢按压固定头部。握紧鼠尾根部，向后、向上快速用力牵拉，同时左手固定头部不动。 可清晰听到 / 感受到颈椎断裂的轻微脆响，此时脊髓与脑干分离，确保完全死亡，避免假死。

PS:注意避免被小鼠咬伤（致敬每一只科研用鼠）

2、取小肠

用75%的酒精对小鼠表面进行消毒，使用手术剪剪开小鼠腹部皮肤并暴露腹腔； 在小肠胃与十二指肠连接处剪开，一边分离小肠周围脂肪组织和肠系膜，一边拉出小肠，之后在小肠和盲肠 连接处剪断，从而分离出小肠，将小肠放入装有10mL 1xPBS（abs962）的培养皿中；

3、去除表面脂肪+纵向剪开小肠+清洗

使用眼科剪剪去小肠表面的派氏结和去除表面所有的脂肪和肠系膜残余组织，再用剪刀纵向剪开小肠暴露内容物，并在培养皿中冲洗干净；

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4、剪切并消化小肠

将小肠剪成0.5cm左右的小段，在37℃培养箱中，80rpm孵育30 min，取出解离后小肠，用移液枪吹打数次。

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5、过筛+离心

将解离好的细胞悬液使用70 μm细胞筛网过滤至新的50 mL离心管中，加入3-5 mL预冷PBS冲洗筛网并过滤，将得到的细胞悬液在4℃，400 g条件下离心5 min，弃去上清；细胞沉淀使用预冷的1x PBS（abs962）缓冲液重悬，4℃，400 g条件下离心5 min，弃去上清；

解离后小肠过筛

离心后小肠