Recombinant Human KLHL32蛋白怎么用

1. Human KLHL32是什么？结构域如何分工？

KLHL32 全称 Kelch like family member 32，属 Kelch 样蛋白家族，典型结构为 N 端 BTB 结构域加 C 端若干 Kelch 重复：BTB 负责与 Cul3 结合，Kelch 重复负责招募底物，组装进 Cullin-RING 泛素连接酶复合体。货号 abs0712606 的 Recombinant Human KLHL32 蛋白对应 UniProt Q96NJ5，覆盖 130 个氨基酸，理论分子量 60 kDa，种属 Human。做底物招募实验前先核对片段是否含 Kelch 重复区。

2. Recombinant Human KLHL32蛋白怎么表达纯化？

货号 abs0712606 的 Recombinant Human KLHL32 蛋白来源标注为 HEK293。哺乳动物细胞表达系统在含多个重复序列的蛋白上表现更稳，折叠错误导致的聚沉概率更低。纯化靠 N-MBP&C-His 双标签：N 端 MBP 提高融合蛋白可溶性，C 端 His 用于镍柱亲和捕获。洗脱后按峰收集，产物以 SDS-PAGE 核对 60 kDa 主带，OD280 定量后分装。

3. KLHL32重组蛋白能做哪些实验？

KLHL32 重组蛋白常用在六类实验：His Pull-down 或 Co-IP 验证与 Cul3 的结合；体外泛素化体系里充当底物受体，与 Cul3-RBX1 复合体共孵育；Western blot 验证抗体特异性；ELISA 包被筛抗血清与杂交瘤上清；SPR 或 BLI 测底物肽段的结合亲和力；质谱做定量参照。复合体组装类实验对蛋白浓度较敏感，先做梯度预实验再铺开。

4. KLHL32蛋白怎么用PBS复溶与冻存？

复溶介质按产品页写的是 Phosphate buffered saline。开盖前低速离心，把管壁与管盖附着的粉末收拢，加入 PBS 至目标浓度，室温静置几分钟，必要时轻柔吹打，不用涡旋振荡。溶解后按单次用量分装，-20℃ 冻存，产品页标注效期 12 months，并提示避免反复冻融。分装体积越小，单次取出后剩余样品受影响越少。

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