距离毕业答辩还有____天，组化实验做不完，小爱过来想办法

一眨眼已经到了三月中旬了，想必各位老师渡过了一个学生时代最长的寒假，假是放舒服了，可这实验可怎么办呢，
 

怎么样才能快速结束自己的实验并有一个好的结果呢，小爱不忍大家在家里着急上火，献给大家小爱六字真言：

多  色  组  化  服  务 ！

多重荧光免疫组化(mIHC)实验原理
 

 TSA 技术 (Tyramide Signal Amplification?，酪胺信号放大技术):简单来说，用该方法做多重免疫荧光是利用二抗上带有的 HRP(而不是直接偶联荧光素)，来催化后续添加入体系的非活性荧光素。

荧光素在 HRP 和过氧化氢的作用下被活化，跟临近蛋白的酪氨酸残基共价偶联，使得蛋白样品与荧光素稳定结合。
 

然后微波处理，前一轮非共价结合的抗体被洗掉，共价结合的荧光素还留存在样品上。再换个一抗来第二轮孵育，周而复始。等到所有抗体孵育结束，荧光素都结合好后，最后去检测结果。
 

由于每次体系中都只有单一抗体孵育，因此无需担心抗体交叉反应，以及一抗二抗种属匹配问题，大大减少了实验设计时不同种属抗体选择匹配的限制。
 

也就是说，如果用 TSA 技术，同一张片子上所有的靶标都可以选用特异性高的兔单克隆抗体。搭配同一支抗兔的 HRP 二抗就可以进行实验，而且信号放大的倍数大大增强。

荧光法多重免疫组化，可同时进行五个颜色通道以上，这种情况下发射光谱会重叠，我们可以借助多光谱成像系统来解决这个问题。这是传统间接荧光法染色和显色法多重免疫组化所做不到的。而且还能真实反映关键蛋白的表达情况和相互之间的关系，从而极大地节约珍贵的样品。

有困难，找小爱，轻松毕业不慌张~
 

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