多重免疫组化常见问题答疑

2020-03-26

B细胞、T细胞、DC细胞常用maker能推荐下吗？

T细胞：CD3、CD4、CD8、FoxP3（再细化还有：GranzymeB、PD-1、TIM-3、CD45）
B细胞：CD19 ；
DC细胞：CD8α、CD11b

TSA技术原理中有抗体洗脱的步骤，但是在你们的试剂盒步骤说明中却没有？

试剂盒步骤中的抗原修复过程就是抗体洗脱过程

在指标与染料的搭配以及染色顺序上，有什么规律吗？

并没有一个特别的线性关系，和蛋白的种类、表达量以及修复条件都有关系，所以会多因素考虑，多尝试，预实验很重要。

如果我能提供抗体给你们做服务的话，需要的抗体量是多少？

需要的抗体量要根据样本数来，但一般来讲，50-100ul的抗体足够完成预实验+正式实验了。

我这边提供抗体的话，抗体需要满足什么条件吗？

抗体最起码要满足IHC/IF的实验应用，各品牌供应商都会提供相应的实验验证的，爱必信组化抗体经过严格实验验证，是不错的选择。

我的组织还有GFP蛋白，给结果的时候能排除干扰吗？

可以的，结果分析的时候可以避免绿色通道，分析软件赋予的颜色是伪彩色，可以更换其他颜色。

多色样本的寄送有条件限制吗？

正常的石蜡切片和组织芯片很稳定，只要防震盒常温运输即可，冰冻切片的话，需要干冰低温运输。

实验用时真的一天能做完吗？

相比普通的组织荧光实验，我们一抗的孵育时间只需室温30min，二抗和信号放大步骤只需孵育10min，能大大节约时间，五色左右可在一天内做完。

抗体洗脱和微波修复哪种方式洗脱效果更好？

微波修复洗脱更稳定，抗体洗脱液对大多数抗体都管用，难洗的抗体延长洗脱时间就可以啦

多色用的一二抗各是什么种属？

多色的优势在于一二抗种属无需特别要求，一抗根据样本种属选择既可，二抗根据一抗选择即可，多个抗体组合，种属不会有影响。

染料的选择会影响后染色吗，有共定位的话怎么办

共定位的情况，我们可以通过单一通道观察来更好的检测各指标的分布情况，染料不会对染色有影响，串色的情况需要预实验做充足，包括抗体稀释比例，染料与放大液比例，修复条件的确定。

抗体修复液每一轮修复都要更换吗？

是的，每一轮都要根据抗体选择相应的修复液

所有操作要避光吗？

不需要，在常规环境下操作就可以，染料的荧光强度很高

爱必信热卖免疫组化产品推荐：

实验步骤	推荐指数	货号	产品名称	规格	分类
样本制备		abs9134	Formaldehyde	25ml,500ml,1L,4L	固定液
	★★★★★	abs9179	4%多聚甲醛/通用型组织固定液	500ml	固定液
	★★★	abs9131	Chromium(III) potassium sulfate dodecahydrate	5g,100g	处理玻片防脱片
	★★★	abs9172	Poly-D-lysine (Mw 150,000-300,000)	25mg	处理玻片防脱片
	★★★	abs9135	Gelatin	100g,500g	处理玻片防脱片
辅助试剂		abs9256	10×TBS	500ml	缓冲液
		abs952	10*TBST	100ml,1L	缓冲液
		abs961	10×PBS缓冲液	500ml,500ml*10	缓冲液
		abs962	1×PBS缓冲液	500ml,500ml*10	缓冲液
		abs9149	Triton X-100/曲拉通X-100	100ml,500ml	缓冲液
抗原修复		abs9145	Pepsin（1:3000）	50g,100g	抗原修复液
		abs9118	Proteinase K	100mg,1g	抗原修复液
	★★★	abs9247	EDTA抗原修复液(50×)	100ml	抗原修复液
	★★★	abs9207	冰冻切片快速抗原修复液(5×)	100ml	抗原修复液
	★★★	abs9249	柠檬酸钠-EDTA抗原修复液(40×)	100ml	抗原修复液
	★★★	abs9248	柠檬酸钠抗原修复液(50×)	100ml	抗原修复液
	★★★	abs9208	细胞爬片抗原修复液（1X）	100ml,500ml	抗原修复液
封闭		abs933	Goat serum	10ml,50ml	封闭血清
		abs936	Horse serum	200ml（2*100ml）	封闭血清
		abs939	Normal Monkey serum	100ml	封闭血清
		abs937	Normal mouse serum	100ml	封闭血清
		abs946	Rabbit serum	10ml,50ml	封闭血清
		abs947	Rat serum	100ml	封闭血清
		abs935	The ass/donkey serum	10ml,50ml	封闭血清
		abs9155	牛血清白蛋白（BSA）	50g,100g	封闭液
抗体孵育	★★★★★	abs957	即用型高效免疫组化二抗试剂盒	5ml	二抗试剂盒
抗体孵育	★★★★★	abs929	PAP Pen 组化笔	1支	组化笔
显色/复染	★★★★★	abs9210	DAB 显色试剂盒（棕黄色，IHC）	1kit	显色试剂
	★★★	abs47047616	DAPI染色液	10ml,50ml	荧光染料
		abs9105	Propidium Iodide	5mg,10mg	荧光染料
		abs9140	Methyl Green, 0.1% w/v aq. soln.	100ml	荧光染料
		abs9142	Nuclear Fast Red	5g	荧光染料
	★★★★	abs9217	苏木素-伊红(HE)染色试剂盒	10g,25g	荧光染料
封片		abs9177	中性树胶（镜检用永久封片剂）	100ml
		abs9234	抗荧光淬灭封片液	5ml
		abs9235	抗荧光淬灭封片液（含DAPI）	5ml,25ml
		abs9236	抗荧光淬灭封片液（含PI）	1ml

爱必信特色产品线(全部现货)：
二抗、标签抗体、对照抗体；WB相关：ECL发光液、预染marker、预制胶；IHC相关：二抗试剂盒、组化笔；IP/CoIP试剂盒；细胞因子、信号通路调节剂；血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE；凋亡试剂盒、呼吸爆发试剂盒；动植物提取物，定制服务(抗体/多肽/蛋白)...