石蜡切片制备常见问题解答

2020-12-28

石蜡包埋制片术是组织切片制作最常用的一种技术。其基本步骤包括取材、固定、脱水、浸蜡、包埋、切片、染色和封片等，其中切片是最重要的环节。我们在工作实践中发现，切片制作过程中常常由于多方面的原因在切片这一环节中遇到困难，甚至导致制片失败。针对切片过程中出现的问题，我们积极寻找原因，探究解决问题的方法。现以问题一原因一解决方法的模式，推送如下。

问题	原因	补救方法
石蜡带弯曲不直	石蜡块上下两边不平行	取下台木，将两边修干
	石蜡块的上下两边不和刀口平行	调节标本台，使两者平行
	刀口锋利不一，局部产生差异	移动刀片，改用新的刀口
	蜡块的一边较另一边为软，或两边的硬度不一致	待蜡块冷却后再切，或重新包埋
	材料未居蜡块正中央	用刀片切去部分石蜡，使材料居中
	材料大而形不正	在大的一边切去少许石蜡
切片分离、不能连成带状	室温过低	在切片机上方开一电灯或提高室温
	石蜡过硬	在蜡块面加一层45℃的软蜡或用手指蜡摩擦块面
	材料边缘留蜡太少	重新包埋
	刀的角度不适合	矫正刀的角度
切片卷起呈圆筒状	室温过低	提高室温
	石蜡过硬	加软蜡
	刀口太钝	用毛笔将蜡片摊开压住，切2—3片即成带
	刀的倾角太大	减小倾角
切片纵裂	刀有缺口	可移动刀口
	石蜡块中含有颗粒、杂质	将颗粒拽去
	刀口留有碎屑或细丝	清洁刀口
	组织太硬	让包埋块在水中浸泡
切片有横纹	刀和台木的固定螺丝太松	旋紧螺旋
	刀口倾斜度太大	可放平1—2。后再切
	刀口有石蜡屑	用氯仿拭去
切片厚薄不匀原因	切片机有毛病	矫正切片机装置
	夹刀不当	对症治疗
	未旋紧标本台螺旋	旋紧螺旋
	石蜡块过硬	将石蜡块在水中浸泡
材料发生裂隙破碎或脱落	脱水不干净	无法弥补
	有透明剂残留	增加浸蜡时间，重新包埋
	石蜡透入时，温度过高或时间过长	无法补救
	由于脱水剂和透明剂的影响，使组织变硬发脆	用正丁醇、叔丁醇和二氧六环等进行脱水和透明
	材料太硬或太粗	在蜡块表面涂一薄层火棉胶溶液
切片时发生沙沙声	组织块过硬	浸泡水中软化
	包埋温度过高	无法补救
	材料内留有结晶体	无法补救
石蜡块将蜡带抬起	由于摩擦而产生静电荷所致	提高室温
	石蜡块上面附有石蜡碎屑	用刀片将碎屑清除
	刀口上附有石蜡碎屑	用二甲苯或氧化清除

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实验步骤	推荐指数	货号	产品名称	规格	分类
样本制备	★★★★★	abs9179	4%多聚甲醛/通用型组织固定液	500ml	固定液
	★★★	abs9131	Chromium(III) potassium sulfate dodecahydrate	5g,100g	处理玻片防脱片
	★★★	abs9172	Poly-D-lysine (Mw 150,000-300,000)	25mg	处理玻片防脱片
	★★★	abs9135	Gelatin	100g,500g	处理玻片防脱片
辅助试剂		abs9256	10×TBS	500ml	缓冲液
		abs952	10*TBST	100ml,1L	缓冲液
		abs961	10×PBS缓冲液	500ml,500ml*10	缓冲液
		abs962	1×PBS缓冲液	500ml,500ml*10	缓冲液
		abs9149	Triton X-100/曲拉通X-100	100ml,500ml	缓冲液
抗原修复		abs9145	Pepsin（1:3000）	50g,100g	抗原修复液
		abs9118	Proteinase K	100mg,1g	抗原修复液
	★★★	abs9247	EDTA抗原修复液(50×)	100ml	抗原修复液
	★★★	abs9207	冰冻切片快速抗原修复液(5×)	100ml	抗原修复液
	★★★	abs9249	柠檬酸钠-EDTA抗原修复液(40×)	100ml	抗原修复液
	★★★	abs9248	柠檬酸钠抗原修复液(50×)	100ml	抗原修复液
	★★★	abs9208	细胞爬片抗原修复液（1X）	100ml,500ml	抗原修复液
封闭		abs933	Goat serum	10ml,50ml	封闭血清
		abs936	Horse serum	200ml（2*100ml）	封闭血清
		abs939	Normal Monkey serum	100ml	封闭血清
		abs937	Normal mouse serum	100ml	封闭血清
		abs946	Rabbit serum	10ml,50ml	封闭血清
		abs947	Rat serum	100ml	封闭血清
		abs935	The ass/donkey serum	10ml,50ml	封闭血清
		abs9155	牛血清白蛋白（BSA）	50g,100g	封闭液
抗体孵育	★★★★★	abs957	即用型高效免疫组化二抗试剂盒	5ml	二抗试剂盒
抗体孵育	★★★★★	abs929	PAP Pen 组化笔	1支	组化笔
显色/复染	★★★★★	abs9210	DAB 显色试剂盒（棕黄色，IHC）	1kit	显色试剂
	★★★	abs47047616	DAPI染色液	10ml,50ml	荧光染料
		abs9105	Propidium Iodide	5mg,10mg	荧光染料
		abs9140	Methyl Green, 0.1% w/v aq. soln.	100ml	荧光染料
		abs9142	Nuclear Fast Red	5g	荧光染料
	★★★★	abs9217	苏木素-伊红(HE)染色试剂盒	10g,25g	荧光染料
封片		abs9177	中性树胶（镜检用永久封片剂）	100ml
		abs9234	抗荧光淬灭封片液	5ml
		abs9235	抗荧光淬灭封片液（含DAPI）	5ml,25ml
		abs9236	抗荧光淬灭封片液（含PI）	1ml

Absin特色产品线(全部现货)：
WB相关：ECL发光液、预染marker、预制胶；IHC相关：二抗试剂盒、组化笔；IP/CoIP试剂盒；激动剂/抑制剂；血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE；凋亡试剂盒；呼吸爆发试剂盒；ELISA试剂盒；重组蛋白；抗体: 二抗、标签抗体、对照抗体；定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)...