做ELISA实验，您还需要注意这些...

酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，简写ELISA）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法，分为三种方法，夹心法、竞争法、间接法，最常用的就是夹心法。

ELISA夹心法原理示意图

如何选择一个合适的ELISA试剂盒？

1、知道所需要品牌试剂盒的命名规则，如Absin的命名规则是：种属-检测指标-（High Sensitivity）-ELISA Kit

①样本的来源种属，首先要确定您的样品是一个来自哪里，然后选择对应的试剂盒种属
②需要检测样本中的哪个指标

举例：我有一个小鼠的样本，我想检测它免疫球蛋白E的含量——选择Mouse IgE ELISA Kit（abs552010）

2、待测因子的表达水平（对应检测限的高低，表达水平较高的可以选择普通的kit，如果表达水平过低，已经落在盒子的检测限之外，可以考虑选择对应的高灵敏的盒子，有更低的检测下限）

3、仪器——最关键是需要有酶标仪，检测波长需要450nm
稀释液的种类，好的盒子标准品的稀释液和样品的稀释液是不同的（Absin的盒子一般区分了标准品稀释液和检测缓冲液即样品稀释液）

ELISA试剂盒一般使用流程如下：

实验注意事项：

1、每一个不同的试剂盒都要重新检测标准品，做标曲，否则会有较大误差
2、每次洗涤的步骤都要洗干净，如果是手动洗涤，每次拍板用的滤纸都要更换，防止交叉污染
3、加样量要完全精准，使用洗液枪枪头不能有多余液滴残留，会导致加样量偏多
4、孵育样品、检测抗体和显色底物均需要覆盖封板膜，减少污染和挥发，且每次使用后都要更换新的封板膜，防止交叉污染
5、洗涤缓冲液如果析出结晶，不溶解，可以提高至55℃并多次摇晃，溶解后再按比例稀释
6、血清样本取样时要注意，避免溶血、脂血等样本。如样本条件受限，建议用样本稀释液适当稀释，减少基质效应影响
7、实验之前将微孔板和试剂在室温下平衡；不要将微孔板置于温度变化太大的地方（如阳光直射、通风处等）；可用铝箔包住微孔板底部及下部外沿降低边缘效应和漂移；不使用边缘的孔。综上所述以尽量减少边缘效应。
8、ELISA数据处理有专门的软件，并且要核对说明书选择合适的拟合曲线

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