酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,简写ELISA)指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上,利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法,分为三种方法,夹心法、竞争法、间接法,最常用的就是夹心法。
ELISA夹心法原理示意图
如何选择一个合适的ELISA试剂盒?
1、知道所需要品牌试剂盒的命名规则,如Absin的命名规则是:种属-检测指标-(High Sensitivity)-ELISA Kit
①样本的来源种属,首先要确定您的样品是一个来自哪里,然后选择对应的试剂盒种属
②需要检测样本中的哪个指标
举例:我有一个小鼠的样本,我想检测它免疫球蛋白E的含量——选择Mouse IgE ELISA Kit(abs552010)
2、待测因子的表达水平(对应检测限的高低,表达水平较高的可以选择普通的kit,如果表达水平过低,已经落在盒子的检测限之外,可以考虑选择对应的高灵敏的盒子,有更低的检测下限)
3、仪器——最关键是需要有酶标仪,检测波长需要450nm
稀释液的种类,好的盒子标准品的稀释液和样品的稀释液是不同的(Absin的盒子一般区分了标准品稀释液和检测缓冲液即样品稀释液)
ELISA试剂盒一般使用流程如下:
实验注意事项:
1、每一个不同的试剂盒都要重新检测标准品,做标曲,否则会有较大误差
2、每次洗涤的步骤都要洗干净,如果是手动洗涤,每次拍板用的滤纸都要更换,防止交叉污染
3、加样量要完全精准,使用洗液枪枪头不能有多余液滴残留,会导致加样量偏多
4、孵育样品、检测抗体和显色底物均需要覆盖封板膜,减少污染和挥发,且每次使用后都要更换新的封板膜,防止交叉污染
5、洗涤缓冲液如果析出结晶,不溶解,可以提高至55℃并多次摇晃,溶解后再按比例稀释
6、血清样本取样时要注意,避免溶血、脂血等样本。如样本条件受限,建议用样本稀释液适当稀释,减少基质效应影响
7、实验之前将微孔板和试剂在室温下平衡;不要将微孔板置于温度变化太大的地方(如阳光直射、通风处等);可用铝箔包住微孔板底部及下部外沿降低边缘效应和漂移;不使用边缘的孔。综上所述以尽量减少边缘效应。
8、ELISA数据处理有专门的软件,并且要核对说明书选择合适的拟合曲线
Absin热卖ELISA试剂盒
货号
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名称
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货期
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abs510007-96T
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Human IFN-gamma ELISA Kit
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现货
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abs510003-96T
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Human IL-6 ELISA Kit
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现货
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abs510006-96T
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Human TNF-α ELISA Kit
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现货
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abs520010-96T
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Mouse TNF alpha ELISA Kit
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现货
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abs520004-96T
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Mouse IL-6 ELISA Kit
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现货
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abs520001-96T
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Mouse IL-1 beta ELISA Kit
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现货
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abs510001-96T
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Human IL-2 ELISA Kit
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现货
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abs520007-96T
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Mouse IFN gamma ELISA Kit
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现货
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abs530003-96T
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Rat IL-6 ELISA Kit
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现货
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abs530002-96T
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Rat IL-1 beta/IL-1F2 ELISA Kit
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现货
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abs520003-96T
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Mouse IL-4 ELISA Kit
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现货
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abs530007-96T
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Rat TNF-α ELISA Kit
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现货
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abs530008-96T
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Rat IL-10 ELISA KIT
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现货
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abs530004-96T
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Rat IFN-γ ELISA KIT
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现货
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abs520017-96T
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Mouse CXCL1/KC (IL-8) ELISA Kit
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现货
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