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公司动态

mRNA疫苗研究明星爆品——T7 RNA聚合酶

2021-12-03

T7 RNA Polymerase,即T7 RNA聚合酶,是T7噬菌体DNA编码的酶,对T7启动子序列具有高度特异性。本酶是依赖于DNA的RNA聚合酶,具有 5′→3′的RNA聚合酶活性,可以催化单链或双链DNA T7启动子下游NTP的掺入,合成与T7启动子下游的模板DNA互补的RNA。
产品特点:
该酶对T7启动子具有高度特异性,不识别其它生物来源的启动子。可以识别修饰的核苷酸,例如生物素标记、荧光素标记、放射性同位素、地高辛标记dNTP,用于各种标记RNA的合成,进行下游实验。

质量保证:

1.SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带,毛细管电泳检测纯度在95%以上;
2.酶动力学实时荧光法显示无DNA酶及RNA酶污染;
3.光度测定法显示内毒素含量≤10 EU/mg。

纯度验证


RNA酶残留定量检测

T7 RNA聚合酶 RFU RFU平均值 CV% Ratio
DNA酶残留定量检测
T7 A 6730 7112.5 16.914 6.65
7495
T7 B 6188 6204 0.731 5.8
6220
T7 absin 5991 6218 10.352 5.81
6445
RNA酶残留定量检测
T7 A 18726 17918 6.3773 1.1
17110
T7 B 53599 41543.5 41.039 2.56
29488
T7 absin 22545 21289.5 8.34 1.31

应用实例
【RNA体外转录合成】

1. 在RNase free的离心管中加入右侧表格中各组分配制反应体系
2. 将上述反应液混合均匀,低速离心至管底,37℃孵育4个小时。若转录本长度小于100 nt,增加反应时间至4-8个小时;
3. 转录后取样品进行凝胶电泳,取样1μL稀释到5 μL,然后用1%的琼脂糖凝胶进行检测,以确定转录是否成功.
4. 反应完成后,加入DNase 1 (RNase free) , 37 ℃孵育30 min以去除模板DNA.
注:
(I)为了特定区域的有效转录,建议在其区域下游把模板DNA预先切成平端或5‘突出末端.
(2)反应体系于室温配置。由于10xTranscription Buflfer中含有亚精胺,低温下亚精胺浓度过高容易引起DNA模板沉淀,建议最后加入模板DNA.
(3)建议在PCR仪中进行反应,为防止蒸发,建议开启热盖功能.
(4)使用试剂、容器等无RNA酶污染。 

组分 体积
DNase RNase-Free Water Up to 20 μL
ATP/CTP/GTP/UTP(100mM each) 2μL each
10x Transcription Bufler 2 μL
DNA template 0.5-2μg
RNase Inhibitor (40 U/μL) 0.5 μL
Inorganic PyTophosphatase(0.1U/μL) 0.5μL
T7RNA Polymerase (1000 U/μL) 0.2 ~ 1 μL
Mg2+ (400 mM) 1 μL
Total Volume 20 μL


产品信息

货号 名称 规格
abs60153 T7 RNA 聚合酶 50KU/200KU/1000KU


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