细胞培养之清洁大作战

2022-09-06

养细胞的人往往谈“污”色变，明明已经小心谨慎，明明已经步步为营，恨不得戴着显微镜操作，发现污染则前功尽弃。除了在操作过程中保证严格无菌以外，做好培养器具的清洁以及预防培养基污染更是至关重要。

如何判断细胞污染？

1、培养基浑浊，可以初步判断是细菌污染。
2、培养基不浑浊，有丝状物质可以初步判断是真菌污染。
3、培养基不浑浊、没有丝状物质，但是细胞状态变差，生长变慢，在显微镜下观察可能会有小黑点，是细胞凋亡坏死，释放出大量碎片，看起来就像黑胶虫，细胞传代以后就出现细胞间黑点，细胞空泡化，很多类似凋亡、坏死的细胞，最终细胞漂浮，完全死亡。

培养环境大扫除

细胞房、培养箱、水盘、水浴锅...除了是细胞生长的温床，同时也是孕育杂菌的温床，因此养细胞之前，我们要对它们进行彻彻底底的大扫除！

Absin为您提供安全、彻底、又高效的除菌全家桶，包含水浴锅抑菌剂（abs9371）、培养箱除菌剂（abs9372）、细胞房除菌剂（abs9373）、水盘抑菌剂（abs9374），由乳链菌肽、纳他霉素、尼泊金酯类、水等组成，无挥发性，分散均匀，热稳定性高。这套试剂能在湿度较大的条件下杀死常见的毛霉、黑霉、青霉、交链孢霉等霉菌孢子，并能抑制大多数的真菌和细菌生长，如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌等。

除菌案例：

抑制枯草芽孢杆菌

加入除菌试剂后，可以显著抑制枯草芽孢杆菌的生长

抑制霉菌

接种 106 cfu/mL的霉菌至霉菌培养基上，待菌长满后，实验组1、2分别喷洒水浴锅抑菌剂（abs9371）、培养箱除菌剂（abs9372）、细胞房除菌剂（abs9373）、水盘抑菌剂（abs9374），实验组3喷洒无菌水。

喷洒试剂前

喷洒试剂等待24h后

与常见清洁试剂对比：

清洁试剂	优劣势
酒精	有刺激性气味，只能用于擦拭物体表面，不可以用于水盘和水浴锅，且只能抑制微生物生长，不能杀灭，要杀灭需要长时间浸泡，已经污染真菌的实验室用酒精消毒效果不明显
甲醛	有刺激性气味有毒致癌
饱和硫酸铜	只能用于水盘且有腐蚀性
新洁尔灭	苯扎溴铵，对革兰阳性细菌作用较强，但对绿脓杆菌、抗酸杆菌和细菌芽孢无效
84消毒液	次氯酸钠，有一定的刺激性与腐蚀性，有挥发性。
Absin清洁系列	发酵产品、无气味、无刺激性、无毒性、热稳定、无挥发性、安全环保。具有广谱和高效性，对真菌和细菌都有杀灭作用。

保卫细胞，消灭支原体

比杂菌污染更棘手的则是支原体污染，它也是是细胞培养领域的一个世界性问题，世界各国细胞系支原体污染的平均比例为30-60%。支原体的直径约为 0.1-0.3μm，这也就意味着它们可以透过常见的滤膜（0.22-0.45μm），因此常规的无菌过滤方法不能将其去除，而常用的抗生素也对支原体无效。

当支原体污染发生后，它们不会使细胞死亡，甚至能与细胞长期共存，也不会使培养基发生浑浊，细胞外观上看起来也不会有明显变化，实际上却埋下了“隐疾”。支原体在潜移默化中悄悄引起细胞变形，影响DNA合成，抑制细胞生长，竞争营养，分泌有害代谢产物，迅速降低培养液中的葡萄糖，形成酸从而改变Ph值；消耗精氨酸、抑制蛋白合成、细胞分裂减慢、停止生长等，最终影响实验结果。

Absin支原体清除试剂&预防试剂

类型	支原体清除剂（）	支原体预防剂（）
有效成分	多肽
工作原理	1、支原体和细菌带负电荷，多肽带正电荷，互相吸引。 2、多肽作用于支原体细胞膜，使其穿孔，改变渗透压。 3、支原体对渗透压敏感，渗透压的突变可致细胞破裂死亡。
优势	1、相较于抗生素类，本品无耐药性 2、无二次污染，随着培养时间的延长，会被缓慢降解为氨基酸 3、细胞毒性小，已在多种细胞上进行过验证
区别	·100%清除支原体的污染； ·完全清除支原体，只需3-6天； ·清除血清、培养基中支原体污染；	·100%预防支原体的污染； ·广谱性，替代双抗； ·用于预防血清、培养基污染； ·用于发酵、细胞治疗等领域；
使用范围	污染后清除支原体，部分敏感细胞，推荐1:2000处理6天	培养之前预防支原体污染

案例：

清除猪IPEC-J2细胞中的支原体

支原体清除剂（）处理猪IPEC-J2细胞3天后，采用Hocest33342染色法对处理前后的细胞进行染色。

Absin支原体清除试剂与抗生素类清除试剂对比

400bp左右有条带的为支原体污染。下图是被支原体污染后经支原体清除剂（）（9、10 条带）和抗生素类试剂（11、12）处理后效果的对比。

相关产品

货号	品名	规格	货期
	水浴锅抑菌剂	100ml	现货
	培养箱除菌剂	480ml	现货
	细胞房除菌剂	480ml	现货
	水盘抑菌剂	20ml	现货
	支原体清除剂	200ul/200ul*5	现货
	支原体预防剂	500ul*4	现货

Absin特色产品线：
WB相关：ECL发光液、预染marker、预制胶；IHC相关：二抗试剂盒、组化笔；IP/CoIP试剂盒；激动剂/抑制剂；血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE；凋亡试剂盒；呼吸爆发试剂盒；ELISA试剂盒；重组蛋白；抗体: 二抗、标签抗体、对照抗体；定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)...

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