B27无血清添加剂在神经类细胞培养中的应用

2022-10-11

一、神经细胞培养的目的

近年来阿尔兹海默病、神经胶质瘤、帕金森病、焦虑症、抑郁症等神经系统疾病已经成为全球神经科学领域研究的重点，感染新冠病毒对神经系统的造成影响及新冠病人的神经系统表现等疫情相关方面已经成为近两年神经科学领域的研究热点，所以神经细胞培养的质量直接影响着研究工作的进展，是神经科学研究的基石。神经系统是由括神经元和神经胶质细胞构成的复杂机能系统，这两种细胞与其他体细胞的生物学形态和特征有着明显差异，故培养方法也不同。

图1 神经元示意图

二、培养神经元细胞的方法

神经组织体外培方法是1907年Harrison对蛙的凝固淋巴块上进行蛙的胚神经组织的悬滴培养，发现了神经纤维的生长。随着数十年的发展，后续又发现了体外培养的方法。培养常规神经元细胞的主要方法分为以下二种：

（1）组织块培养

该方法是从体内取出少量的组织，使其在体外适宜的培养条件下生存和生长并能够维持其结构和功能。其优点就是所需要的培养液少，并且可以保留组织某些原有的生态结构。但是组织块中的细胞容易受到培养环境中的某些因素影响，并且此法的培养空间小，氧气和二氧化氮供少，培养空间湿度难以控制，水分会蒸发，过程中也难以观察单个神经元生长。

（2）分离细胞培养法

首先将神经组织分离制成单细胞悬液，然后接种于合适的底物上，数小时后神经细胞开始长出突起，这些突起最终将形成密集的神经纤维网络。在适宜的条件下，这种培养物可维持数月。分离细胞培养最明显优点是可获得单个分散的活细胞。在培养最初几天尚末形成复杂的神经网络之前，可全面观察了解细胞生长发育的情况。此外在细胞培养中可通过染色、显微测量、荧光光度分析仪等方法对其进行测量分析。主要适用于原代细胞培养。

三、B27 添加剂是什么？

我们在培养细胞时为何要加入添加剂主要是因为人工合成的培养基虽然含有细胞生长的基本营养物质和无机盐，但是不同的细胞类型对营养物质的需求不同，大多数在基础的培养液中无法长期存活，更难以分裂，因此我们要在基础的培养中添加一些特殊的物质。

B-27添加剂则是无血清添加剂，其中含有特定抗氧化剂、神经元所需的特定脂肪酸、蛋白及维生素。用于海马神经元和其他中枢神经系统（CNS）神经元的生长和保持其短期或长期活性。B-27添加剂是50X 的液体，可以与Neurobasal培养基或Neurobasal-A培养基组合使用，用于神经细胞培养而不需要再添加饲养层细胞，与其他神经元添加剂相比显著提高了神经元的存活率。此外，还有无维生素 A 型 B-27 添加剂为不含维生素 A 的 B-27 完全添加剂，这种去除了维生素 A 的添加剂可防止干细胞向神经细胞分化。

四、B27 添加剂在细胞研究中应用

B27添加剂的在细胞培养中的应用十分广泛，已经在B27添加剂在胶质瘤干细胞培养（无血清DMEM/F12培养基，添加2%B2、20 ng/ml EGF、10ng/ml bFGF））、初级皮层神经细胞培养（Neurobasal-A培养基，添加2% B27、10uM阿糖胞苷、100U/ml 青霉素和链霉素）、及非小细胞肺癌细胞等细胞培养过程中添加。B27添加剂也可应用于骨肉瘤干细胞的培养中应用，在Integrated analysis of transcriptome-wide m 6 A methylome of osteosarcoma stem cells enriched by chemotherapy（骨肉瘤干细胞培养：DMEM/F12培养基，添加2% B27（Absin）、10 ng/ml human EGF、10 ng/ml human bFGF。）这篇文章中，主要是选择人的OS细胞系--MG63，通过阿霉素DXR诱导，建立了多药耐药性细胞株--MG63 / DXR。通过分析CD133和CD117 / STRO-1其特定的细胞表面标志物；干细胞相关基因的表达量；皮下注射对裸鼠的致癌影响等多个方面数据证明MG63 / DXR具有OSC的特性。

图2 MG63 / DXR具有OSC的特性

五、Absin相关产品

产品信息

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