Caco-2细胞培养攻略

2023-04-10

Caco-2细胞分离自一名72岁男性的直肠原位癌细胞，当长到满时表现出特征性的肠上皮细胞分化。因此，Caco-2细胞模型是十几年来国外广泛采用的一种研究药物小肠吸收的体外模型，具有相对简单、重复性较好、应用范围较广的特点。

表1 Caco-2细胞基本信息

名称	Caco-2（人结直肠腺癌细胞）
形态	上皮样
生长特性	贴壁
营养体系	79%MEM基础培养基（abs9503）+20%胎牛血清优级（abs972）+ 1%双抗（abs9244）

图1 Caco-2（人结直肠腺癌细胞）

首先，我们要讨论的第一个问题是如何判断细胞状态好不好？为了更直观地了解细胞状态，我们可以看一下如下图2和图3。正常的Caco-2细胞呈岛状生长，细胞间连接紧密，细胞群的边界光滑，细胞群中常常含有巨大的空泡（属于正常现象）。

图2 Caco-2正常形态

图3 Caco-2正常形态

接下来，我们讨论第二个问题是该细胞消化难问题。该类细胞间连接紧密，细胞难以消化解离，并且培养时间越久，细胞间连接越紧密越难消化。所以，消化时要注意以下几点：
1、消化前用PBS（）清洗细胞两遍；

2、消化时间控制在5-10分钟，当细胞能够被吹散为小的细胞团块时，即可终止消化；
3、消化吹打成单个细胞再进行传代。

最后，我们要讨论的是细胞贴壁和增殖缓慢问题。尤其刚复苏时细胞贴壁特别慢，一般2到3天贴壁展开（还可能会有空泡）；有少量发亮的细胞漂浮或黏附在细胞克隆上是正常的，随后会进入克隆并正常生长；为避免在细胞附着初期干扰细胞，建议到第三天再换液。

同时该细胞增殖缓慢，倍增时间约为72小时，按1:3传代的情况下，约一周传代一次。由于该细胞对营养需求高，建议使用20%的优级胎牛血清（）。如果细胞随着培养过程，漂浮得越来越严重，甚至大块儿飘起，就要检查培养基成分和培养环境是否出现异常。

本期讲解就到这里了，如有细胞培养问题，欢迎扫码加入我们微信群交流。

注：图源网络和客户，仅供参考学习用

表2 小爱推荐细胞培养类产品

货号	品名	规格
abs981	胎牛血清（特级）	500ml
abs972	胎牛血清（优级）	500ml
abs974	胎牛血清（标准级）	500ml
abs9483	高糖DMEM培养基	500ml
abs9484	RPMI-1640培养基	500ml
abs9505	MEM培养基	500ml
abs9506	α-MEM培养基	500ml
abs9554	Ham's F-12培养基	500ml
abs9563	Ham's F-12K培养基	500ml
abs9561	DMEM/F-12培养基	500ml
abs962	PBS缓冲液	500ml
abs970	D-PBS缓冲液（不含 Ca²⁺ Mg²⁺）	500ml
abs971	D-PBS缓冲液（含 Ca²⁺ Mg²⁺）	500ml
abs9257	Hanks平衡盐溶液（不含 Ca²⁺ Mg²⁺）	500ml
abs9258	Hanks平衡盐溶液（含 Ca²⁺ Mg²⁺）	500ml
abs47014938	胰蛋白酶-EDTA消化液（0.25%），含酚红	100ml
abs47047375	胰蛋白酶-EDTA消化液（0.25%），不含酚红	100mL
abs9479	无DMSO无血清细胞冻存液	100mL
abs9417	无血清细胞冻存液	100mL
abs9473	细胞冻存液（含血清）	100mL
abs9474	组织保存液	100ml
abs9480	组织冻存试剂盒	30ml
abs9486	模具	1个/套
abs9487	小刀	5片/包
abs9481	组织复苏试剂盒	50ml
abs42020125	卡那霉素B硫酸盐	250mg
abs42018967	硫酸庆大霉素溶液	10ml
abs9244	青链双抗	100ml
abs9245	青霉素-链霉素-庆大霉素混合溶液	100ml
abs42013298	两性霉素B	1g
abs44071148	制霉菌素	1g
abs9246	青霉素-链霉素-两性霉素B混合溶液	100ml
abs9252	支原体检测试剂盒	100T
abs9375	支原体清除试剂	200uL×5
abs9376	支原体预防	500uL×4
abs816578	环丙沙星盐酸盐	500mg
abs9374	水盘抑菌剂	20ml
abs9371	水浴锅抑菌剂	100ml
abs9372	培养箱除菌剂	480ml
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WB相关：ECL发光液、预染marker、预制胶；IHC相关：二抗试剂盒、组化笔；IP/CoIP试剂盒；激动剂/抑制剂；血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE；凋亡试剂盒；呼吸爆发试剂盒；ELISA试剂盒；重组蛋白；抗体: 二抗、标签抗体、对照抗体；定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)...

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