胶原蛋白是结缔组织和内脏器官细胞外基质的主要构造成分,在皮肤、肌腱、骨骼中分布最为广泛。从遗传和结构上胶原蛋白分为许多类型。
胶原蛋白I(Collagen, Type I)是由2个α1 链和1个α2 链组成的异源多聚体(图1),在37℃,中性pH 下自发形成三螺旋骨架,是一种优秀的细胞培养用基质,广泛用于肝细胞、成纤维细胞、脊神经节、肌肉细胞、施万细胞、胚肺细胞、上皮细胞和其他大量细胞系。还能用于研究细胞生长、分化、迁移以及发育过程中的组织形态发生。
图1 胶原蛋白I分子模型
鼠尾胶原蛋白I 是根据Birkedal-Hansen 方法,通过醋酸抽提、氯化钠沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备。可用于包被细胞培养器皿,培养细胞表面粘附性,特别适合那些在普通培养器皿表面不易贴壁的细胞,比如成纤维细胞、肝细胞等原代细胞。还可用于三维胶的制备,模拟真实的生长环境,使得细胞在三维环境中生长。
本品为溶于6mM HAc 的无菌溶液(图2),浓度5mg/ml,每个批次产品皆通过细胞培养测试(包括三维空间培养)以保证质量的可靠性。接下来我们了解鼠尾胶原蛋白I的两种用途吧。
图2 鼠尾胶原蛋白I (abs47014921)
一、细胞培养器皿的表面包被
组织培养器皿的表面包被推荐浓度为1-5μg/cm2,起始浓度可首选5μg/cm2。建议根据具体细胞类型来优化。
本品以溶于6mM HAc(=0.36g/L HAc)的无菌溶液形式提供,本身不溶于中性pH,建议用6mM HAc溶液做进一步稀释。配制方法:取34.5μl 冰醋酸(17.4M)加入100ml双蒸水,充分混匀后即得到6mM HAc溶液,0.22μm滤膜过滤除菌后待用。
a. 以包被浓度为 5μg/cm2,先用6mM HAc稀释液将胶原蛋白(5mg/ml)稀释到合适的中间浓度,如50μg/ml, 然后参考表1 不同培养皿内胶原蛋白加量表来加量到各孔内;
b. 以包被浓度为 2μg/cm2,先用6mM HAc稀释液将胶原蛋白(5mg/ml)稀释到合适的中间浓度,如12μg/ml,然后参考表1 不同培养皿内胶原蛋白加量表来加量到各孔内;
表1 不同培养皿内胶原蛋白加量表
培养器皿 |
表面积(cm2,每孔或每皿) |
当包被浓度:2ug/cm2,中间稀释浓度12ug/ml,加入该稀释液体积(ul) |
当包被浓度:5ug/cm2,中间稀释浓度50ug/ml,加入该稀释液体积(ul) |
96孔细胞培养板 |
0.3 |
50 |
30 |
24孔细胞培养板 |
1.9 |
300 |
190 |
12孔细胞培养板 |
3.8 |
600 |
380 |
6孔细胞培养板 |
9.5 |
1580 |
950 |
35mm细胞培养皿 |
8 |
1330 |
800 |
60mm细胞培养皿 |
21 |
3500 |
2100 |
100mm细胞培养皿 |
55 |
9170 |
5500 |
2)室温孵育1h,小心吸掉多余液体,用无菌PBS清洗3~4次后直接使用。或者加完胶原蛋白溶液后,在超净台内开盖过夜晾干。无菌条件下,包被好的器皿在4-25°C至少可保存3个月。
当鼠尾胶原蛋白I使用浓度>1mg/ml,pH 7.0左右皆可形成具有一定强度的三维胶,建议成胶浓度为1-2 mg/ml。
由于本品是以溶于6mM HAc的无菌溶液形式提供,在成胶过程需先加入0.06倍体积的0.1M NaOH中和。
10×细胞培养液(依据培养的细胞种类而定)、0.1M NaOH、无菌水()
b. 将培养器皿在室温(25°C左右)放置20min待胶凝固后,加入适当体积细胞培养液,转移到培养箱中培养。
本期讲解就到这里了,如有细胞培养问题,欢迎扫码加入我们微信群交流。
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表2 小爱细胞培养类产品推荐
货号 |
品名 |
规格 |
|
胎牛血清(特级) |
500ml |
|
胎牛血清(优级) |
500ml |
|
胎牛血清(标准级) |
500ml |
|
高糖DMEM培养基 |
500ml |
|
RPMI-1640培养基 |
500ml |
|
MEM培养基 |
500ml |
|
α-MEM培养基 |
500ml |
|
Ham's F-12培养基 |
500ml |
|
Ham's F-12K培养基 |
500ml |
|
DMEM/F-12培养基 |
500ml |
|
PBS缓冲液 |
500ml |
|
D-PBS缓冲液(不含 Ca2+ Mg2+) |
500ml |
|
D-PBS缓冲液(含 Ca2+ Mg2+) |
500ml |
|
Hanks平衡盐溶液(不含 Ca2+ Mg2+) |
500ml |
|
Hanks平衡盐溶液(含 Ca2+ Mg2+) |
500ml |
|
胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) ,含酚红 |
100ml |
|
胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%),不含酚红 |
100mL |
|
无DMSO无血清细胞冻存液 |
100mL |
|
无血清细胞冻存液 |
100mL |
|
细胞冻存液(含血清) |
100mL |
|
组织保存液 |
100ml |
|
组织冻存试剂盒 |
30ml |
|
模具 |
1个/套 |
|
小刀 |
5片/包 |
|
组织复苏试剂盒 |
50ml |
|
卡那霉素B硫酸盐 |
250mg |
|
硫酸庆大霉素溶液 |
10ml |
|
青链双抗 |
100ml |
|
青霉素-链霉素-庆大霉素混合溶液 |
100ml |
|
两性霉素B |
1g |
|
制霉菌素 |
1g |
|
青霉素-链霉素-两性霉素B混合溶液 |
100ml |
|
支原体检测试剂盒 |
100T |
|
支原体清除试剂 |
200uL×5 |
|
支原体预防 |
500uL×4 |
|
环丙沙星盐酸盐 |
500mg |
|
水盘抑菌剂 |
20ml |
|
水浴锅抑菌剂 |
100ml |
|
培养箱除菌剂 |
480ml |
|
细胞房除菌剂 |
480ml |
Absin特色产品线:
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