外泌体递送mRNA，可实现对艾滋病病毒的稳定抑制！

2023-04-23

2021年9月20日，贝克曼研究所基因治疗中心的研究团队在Nature子刊Nature Communications上发表了题为“Exosome-mediated stable epigenetic repression of HIV-1”的研究论文。

该研究开发出了一种靶向HIV-1启动子的锌指蛋白（ZFP-362），该蛋白与 DNA甲基转移酶3A的活性结构域融合，以诱导长期稳定的HIV-1表观遗传抑制。通过外泌体递送这种抑制性蛋白的mRNA，能够在体内抑制小鼠骨髓、脾脏和大脑中的 HIV 水平，并阻止其复制。这项研究为外泌体介导的治疗性药物系统递送平台以表观遗传方式抑制 HIV-1 感染铺平了道路。

为了实现对 HIV-1 的稳定转录抑制，研究团队开发了一种表达重组融合蛋白 ZFP 362b-DNMT3A（ZD3A）的载体，它可以借助嵌入的核定位信号（NLS）定位到细胞核。该 ZFP 能够与 HIV-1 的 LTR 启动子内的 NF-kB 双联结合位点结合，并与 DNA 甲基转移酶 3 结构域（3A）融合以生成（ZD3A）。长期感染 HIV-1 的 Jurkat 细胞（CHI-Ju）在转染了 ZD3A 后 HIV-1 转录物表达显著降低，并且一直被稳定抑制。

接下来，研究团队构建了几个具有各种阻遏结构域的 ZFP362 融合构建体，包括与PWWP、ADD 和甲基转移酶的活性域融合成为的 ZPAMt，以及与 KRAB 和甲基转移酶结构域融合的ZKMt。ZPAMt和ZKMt有效地抑制了病毒表达。

图1 ZFP 362b-DNMT3A有效抑制 HIV-1 表达

为了确定观察到的沉默所涉及的作用机制，研究团队用 ZPAMt 和 ZKMt 转染细胞并行免疫沉淀，证实了ZFP-362与 HIV-1 启动子的结合。在转染的 CHI-Ju 细胞中，研究团队观察到Gag RNA 的有效抑制，并通过甲基 DNA 免疫沉淀测定法检测到相对于对照HIV-1 LTR 区域 CpG 甲基化的靶向富集。这些数据证实观察到的抑制是ZPAMt 和 ZKMt 将 DNA 甲基化定向到 HIV-1 LTR 的结果。

图2 ZPAMt 和 ZKMt 占据并甲基化 HIV-1 LTR 启动子并以难以激活的长期方式抑制病毒表达

最后，为了确定 ZPAMt 的抗病毒功效，研究团队将 HIV-1 感染的外周血单个核细胞（PBMC）植入到人源化免疫缺陷小鼠，然后对其进行两周的cART治疗以及ZPAMt注射。结果显示， ZPAMt 显显著稳定抑制了 HIV-1 表达，机制在于5'LTR的显著甲基化。最重要的是，ZPAMt 没有产生任何长期毒性。

图3 外泌体包装的 ZPAMt 在体内抑制病毒表达

综上所述，这项工作证明了通过外泌体递送重组ZPAMt可以靶向HIV-1，使之表观遗传沉默，并在病毒感染的细胞中诱导抑制表型。该递送系统为未来开发抑制HIV的疗法铺平了道路。

参考文献

[1] Shrivastava S, Ray RM, Holguin L, Echavarria L, Grepo N, Scott TA, Burnett J, Morris KV. Exosome-mediated stable epigenetic repression of HIV-1. Nat Commun. 2021 Sep 20;12(1):5541.

表1 本期小爱推荐1—线性mRNA

货号	产品名称	规格
abs60174	Cas9 mRNA	100ug/100ug×5/100ug×10
abs60190	Cas9 nickase mRNA	100ug/100ug×5/100ug×10
abs60176	EGFP mRNA	100ug/100ug×5/100ug×10
abs60178	Fluc mRNA	100ug/100ug×5/100ug×10
abs60180	mcherry mRNA	100ug/100ug×5/100ug×10
abs60192	EBFP mRNA	100ug/100ug×5/100ug×10
abs60193	ECFP mRNA	100ug/100ug×5/100ug×10
abs60195	mBanana mRNA	100ug/100ug×5/100ug×10
abs60196	mHoneydew mRNA	100ug/100ug×5/100ug×10
abs60197	mKate mRNA	100ug/100ug×5/100ug×10
abs60198	mOrange mRNA	100ug/100ug×5/100ug×10
abs60199	mPlum mRNA	100ug/100ug×5/100ug×10
abs60311	mtangerine mRNA	100ug/100ug×5/100ug×10
abs60313	tdTomato mRNA	100ug/100ug×5/100ug×10
abs60314	YFP mRNA	100ug/100ug×5/100ug×10
abs60191	Cre mRNA	100ug/100ug×5/100ug×10
abs60194	EPO mRNA	100ug/100ug×5/100ug×10
abs60312	OVA mRNA	100ug/100ug×5/100ug×10
abs60315	β-gal mRNA	100ug/100ug×5/100ug×10

表2 本期小爱推荐2—环状mRNA

货号	产品名称	规格
abs60332	Endless eGFP mRNA	50ug
abs60333	Endless Fluc mRNA	50ug
abs60334	Endless mcherry mRNA	50ug
abs60335	Endless Cas 9 mRNA	50ug
abs60336	Endless EPO mRNA	50ug

表3 本期小爱推荐3——mRNA专用转染试剂

货号	产品名称	规格
abs60259	核酸转染试剂盒	0.5ml/1.0ml/1.5ml
abs60324	PM原代细胞核酸转染试剂盒	0.5ml/1.0ml/1.5ml
abs60325	SP悬浮细胞核酸转染试剂盒	0.5ml/1.0ml/1.5ml

Absin特色产品线：

WB相关：ECL发光液、预染marker、预制胶；IHC相关：二抗试剂盒、组化笔；IP/CoIP试剂盒；激动剂/抑制剂；血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE；凋亡试剂盒；呼吸爆发试剂盒；ELISA试剂盒；重组蛋白；抗体: 二抗、标签抗体、对照抗体；定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)...

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