THP-1细胞培养攻略

2023-04-28

THP-1 为啥养着贴壁了?

THP-1 养贴壁了还能拯救吗?

THP-1细胞很多贴壁的怎么处理啊？

THP-1复苏后，养不起来咋办？

THP-1聚团正常吗？

THP-1已经养了一周了，还是大量聚团，数量还是没那么多，能扩瓶吗？

最近好多小伙伴咨询 THP-1 细胞培养各种难题，问的最多的还是贴壁问题。通过经验总结和资料查询，今天给大家出一份培养攻略，希望帮到大家。

先做一个简短介绍：THP-1 细胞系最初来自一位急性单核细胞白血病患者的血液，属于悬浮细胞，有分化为多种巨噬细胞的能力，是各领域研究常用的细胞系之一。

表1 THP-1（人单核细胞白血病细胞）细胞基本信息

形态	淋巴细胞样
生长特性	悬浮
营养体系	89% RPMI1640基础培养基（）+10% 胎牛血清优级（）+ 1%双抗（）+0.1% mM 2- mercaptoethanol（）

图1 1640基础培养基()和胎牛血清(特级)()

图2 THP-1（人单核细胞白血病细胞）

THP-1单核细胞正常形态为悬浮的体积较小、透亮的圆形细胞，少数聚团成葡萄状，粒粒饱满，轮廓清晰（如图3）。该细胞在偏酸性环境中，生长更快，所以当培养基稍微变黄（呈橘红色）时，是比较适合细胞生长的，此时补液或半换液即可；开启后的1640培养基，长期放置pH会偏高，建议开封后一周内使用完毕。该细胞对血清要求高，血清质量差异可能引起细胞状态变化，建议选用高质量的胎牛血清。

图3 状态良好的THP-1（人单核细胞白血病细胞）

首先，我们要讨论的是THP-1贴壁问题。THP-1细胞培养过程中出现少量细胞贴壁属于正常情况（如图4），不需要担心。可以轻吹收集细胞或者丢弃贴壁部分细胞。但如果当贴壁细胞比例高于20%，说明细胞生长环境有异常，这时候就需要排查培养箱温度及CO₂浓度、培养基成分，以及培养器皿是否异常。可用非TC处理过的培养瓶，不利于细胞贴壁。

图4 部分贴壁的THP-1（人单核细胞白血病细胞）

然后我们要讨论的是THP-1聚团问题（如图5所示）。THP-1细胞在密度较稀时，有少量细胞聚团属于正常现象，不建议将聚团的细胞吹散，等待密度高时，细胞会自然分散开。当细胞密度高时，聚团细胞比例高于30%时，并且细胞团呈糜烂状，细胞之间界限不清，胞体质膜有溃烂感，这种情况下的细胞聚团是异常的。若对细胞没有做过任何实验处理，可优先排查营养体系，比如更换血清品牌或增大血清比例（不超过20%）有助于解决聚团问题。

图5 严重聚团的THP-1（人单核细胞白血病细胞）

最后我们要讨论的是关于THP-1复苏不起来怎么办？（如图6所示）该细胞对冻存密度有依赖，冻存密度建议5*10⁶-10⁷/ml；同时复苏密度也有依赖性，建议不低于3*10⁶/ml。当细胞传过几次代，状态较好时，传代密度维持在5*10⁵/ml-10⁶/ml为宜，超过2*10⁶/ml则需要传代。如有细胞碎片，待细胞密度增大后通过低速离心去除。

图6 复苏状态很差的THP-1（人单核细胞白血病细胞）

本期讲解就到这里了，如有细胞培养问题，欢迎扫码加入我们微信群交流。

注：图源网络和客户，仅供参考学习用

表2 细胞培养类产品推荐

货号	品名	规格
	胎牛血清（特级）	500ml
	胎牛血清（优级）	500ml
	胎牛血清（标准级）	500ml
	高糖DMEM培养基	500ml
	RPMI-1640培养基	500ml
	MEM培养基	500ml
	α-MEM培养基	500ml
	Ham's F-12培养基	500ml
	Ham's F-12K培养基	500ml
	DMEM/F-12培养基	500ml
	PBS缓冲液	500ml
	D-PBS缓冲液（不含 Ca²⁺ Mg²⁺）	500ml
	D-PBS缓冲液（含 Ca²⁺ Mg²⁺)	500ml
	Hanks平衡盐溶液（不含 Ca²⁺ Mg²⁺)	500ml
	Hanks平衡盐溶液（含 Ca²⁺ Mg²⁺)	500ml
	胰蛋白酶-EDTA消化液（0.25%），含酚红	100ml
	胰蛋白酶-EDTA消化液（0.25%），不含酚红	100mL
	无DMSO无血清细胞冻存液	100mL
	无血清细胞冻存液	100mL
	细胞冻存液（含血清）	100mL
	组织保存液	100ml
	组织冻存试剂盒	30ml
	模具	1个/套
	小刀	5片/包
	组织复苏试剂盒	50ml
	卡那霉素B硫酸盐	250mg
	硫酸庆大霉素溶液	10ml
	青链双抗	100ml
	青霉素-链霉素-庆大霉素混合溶液	100ml
	两性霉素B	1g
	制霉菌素	1g
	青霉素-链霉素-两性霉素B混合溶液	100ml
	支原体检测试剂盒	100T
	支原体清除试剂	200uL×5
	支原体预防	500uL×4
	环丙沙星盐酸盐	500mg
	水盘抑菌剂	20ml
	水浴锅抑菌剂	100ml
	培养箱除菌剂	480ml
	细胞房除菌剂	480ml

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