马血清给特别滴细胞特别滴“爱”

众所周知，胎牛血清是细胞培养界的“香饽饽”，备受胞胞们的“宠爱”，其实还有一个“香煎饼”，大家可知道？对一些“挑食”的细胞，马血清可谓是散发着一股“煎饼的清香”。

图1 马血清优级（）

一、马血清的第一大功能是“滋养”一些特别的细胞，如免疫细胞类、成纤维细胞类、上皮细胞类、神经细胞类等。需要添加马血清的常见细胞类型如下：

1）NK（人外周血自然杀伤细胞）和NK-92（人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞）

营养体系：74% α-MEM基础培养基（）＋ 0.2mM Inositol（）＋ 0.1mM β-mercaptoethanol（）＋ 0.02mM Folic Acid（）＋ 100-200U/mL recombinant IL-2（）+ 12.5 %马血清优级（）+ 12.5% 胎牛血清优级（）+ 1% 双抗（）

2）EL-4（小鼠胸腺淋巴瘤细胞）

营养体系：89% DMEM高糖基础培养基（）+ 10% 马血清优级（）+ 1% 双抗（）

营养体系：89% MEM基础培养基（）+ 10% 马血清优级（）+ 1% 双抗（）

营养体系：94% DMEM/F12基础培养基（）+ 5% 马血清（）+ 1% 双抗（）+ 20ng/ml EGF（）+ 0.5ug/ml 氢化可的松Hydrocortisone（）+ 100ng/ml 霍乱霉素choleratoxin+10ug/ml 胰岛素insulin（

营养体系：79% RPMI1640基础培养基（）+ 15% 马血清（）+ 5% 胎牛血清优级（）+ 1% 双抗（）

二、马血清第二大功能是诱导分化作用，有文献报道^【1】马血清在 5-氮杂胞苷诱导脂肪干细胞成肌细胞实验中发挥重要作用。

该研究如下：将第1代长满100 mm培养皿的脂肪干细胞传代至3个6孔板，实验组培养基中加入体积分数为 5% 马血清 +10 μmol/L 5-氮杂胞苷；对照组培养基中单纯添加 10 μmol/L 的 5-氮杂胞苷；空白组为单纯低糖 DMEM 培养基，其余培养、传代及鉴定所需的条件相同。每日光镜观察记录形态，在培养的第 7、14、28、35 天行免疫荧光和流式细胞仪检测肌蛋白表达差异。

该文献的结果与结论是免疫荧光检测成肌特异性胞质蛋白表达以及流式细胞检测相应蛋白表达率提示，加入马血清后的实验组脂肪干细胞的成肌速度和诱导成肌所需时间明显比单纯加入 5-氮杂胞苷的对照组更有优势。实验初步表明马血清在促进脂肪干细胞诱导成肌方面起着缩短诱导成肌所需时间的作用。

同时，马血清在诱导 C2C12（小鼠成肌细胞）分化为多核肌管方面也发挥重大作用。C2C12 细胞是由 D·Yaffe 和 O·Saxel 建立的小鼠成肌细胞株的亚克隆；该细胞分化很快，形成可伸缩的肌管并生成特征性的肌蛋白。将状态良好的骨骼肌细胞以 0.9×10⁵ 接种在96孔板上（每孔100ul），置于培养箱中培养 24h 后，待细胞融合到 70-80% 后，更换成的含有 2% 马血清的完全培养基中，进行诱导分化。（如图2所示）

图3 C2C12（小鼠成肌细胞）向多核肌管方向分化

另外，也有文献报道^【2】传代培养人骨髓间充质干细胞（P3）在 20% 马血清的 L-DMEM 培养液中可分化为脂肪细胞。

此外， 10% 马血清可代替 FBS 用于支持绵羊红细胞的体外抗体应答； 血清 IgG 制备，白蛋白的提取及生物活性研究；免疫组化（IHC）、酶联免疫（ELISA）等免疫实验的封闭剂。

参考文献：

【1】刘杰,傅强.马血清在脂肪干细胞成肌诱导中的作用[J].中国组织工程研究, 15(14)

【2】赵文静,陈亚洁,刘薇.人骨髓间充质干细胞分离培养及生物学特性研究.中国现代医学杂志.2006.16(18):2744-2747


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