萤光素酶报告基因检测so easy！

前几期小爱依次给大家介绍了萤光素酶报告基因相关知识，想必大家对于萤光素酶报告基因检测技术有了一定了解。话不多说，本期给大家安利另一款单萤光素酶报告基因检测试剂盒——爱必信海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒（）。

一、产品简介

真核基因表达调控研究常用的方法是进行报告基因的检测，生物发光法又是报告基因检测最常用的有效手段。萤光素酶能催化底物萤光素的转化，并发射出光子。海肾萤光素酶跟萤火虫萤光素酶类似，也是一胞内蛋白，但是它从海肾中分离得到，大小为36kDa，

发光作用原理也比较简单：海肾萤光素酶只需要氧气就可以催化腔肠素（反应底物），氧化生成高能产物coelenteramide，并发出蓝光，最强发光波长为480nm。其作用反应式为如图1，海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒（）可为在哺乳动物细胞中的表达提供快速、灵敏、稳定的检测方法。

图1 海肾萤光素酶反应化学式

二、产品信息

三、产品特点

1、快速：细胞裂解在10-15min内完成；
2、方便：试剂易于配制，样品检测步骤简单。

四、实验流程

图2 海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒操作流程

五、具体应用

海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒的适用于单报告基因检测，与萤火虫萤光素酶报告基因适用场景类似。具体的应用场景包括而不局限于以下内容：

图3 海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒的应用举例

六、实验数据

使用海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒与市面上同类产品进行对比实验，检测光信号RLU值，本公司产品检测结果高于同类竞品。

七、Q&A

1、检测的萤光数值很低怎么办？

1）可能为转染效率低

a.优化转染实验条件，用较易转染的质粒做阳性对照（如转染过表达萤光蛋白质粒）；
b.确保转染DNA的质量，可通过酶切或琼脂糖凝胶电泳的方法对DNA质量进行鉴定；
c.选择活性较高，处于指数分裂期的细胞进行转染。

2）可能为启动子活性低或诱导失败
a.转染后的细胞培养使用特异性诱导启动子的条件；
b.优化细胞的培养条件，提高萤光素酶的表达量；
c.更换强启动子（如SV40、CMV）。

3）样品裂解效率低
a.细胞培养时间不宜过长，12-36h内最好，长时间培养后，细胞可能会难裂解。
b.加入的裂解液需足量，保证细胞能够充分裂解。

4）检测过程操作不规范
a.选择合适的检测仪器，能够检测化学发光或者生物发光的仪器都适用于该实验；
b.需加入足量底物，保证底物的饱和，否则会造成检测结果出现很大偏差；
c.室温反应。反应时各个组分（细胞裂解产物，底物工作液等）都需要调整到室温；
d.萤光素酶的半衰期一般约30min，加完底物后可立即检测，尽量在30min内完成。

5）底物氧化失效
a.底物避光密封保存，萤火虫萤光素酶底物-20℃保存；海肾萤光素酶底物推荐-80℃保存；
b.反应工作液建议现用现配。

2、进行检测的过程中，萤光信号值太高该如何进行调整？

1）减少质粒转染量；
2）细胞样品裂解后，离心取上清后检测或对裂解产物进行稀释后检测。

注：不建议通过减少底物量来降低萤光值，需要保证底物的饱和来反映萤光素酶真实的表达水平，否则会造成检测结果出现大的偏差。

八、注意事项

1、使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。
2、由于温度对酶反应有影响，所以测定时，样品和试剂均需达到室温后再进行测定。
3、海肾萤光素酶催化的生物发光的最强波长为480 nm，为防止孔间干扰，建议使用白色不透光孔板。

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