细胞培养常用抗生素大全

抗生素(Antibiotics)是由微生物（包括细菌、真菌、放线菌属）或高等动植物在生活过程中所产生的，具有抗病原体或其它活性的一类次级代谢产物或人工合成的类似物，能干扰其他生活细胞发育功能的化学物质。在筛选稳定表达株、抑制微生物或肿瘤细胞、调节细胞等方面发挥重要作用。

抗生素在细胞培养中的使用可以最大限度地降低由于污染导致的宝贵细胞、昂贵试剂以及较多时间的损失。经验丰富的研究人员建议在培养细胞时使用足够浓度的经过细胞培养测试的抗生素。例如青霉素-链霉素是青霉素和链霉素的混合物，广泛用于哺乳动物细胞培养基中，用以防止细菌污染。某些抗生素，如遗传霉素、潮霉素、杀稻瘟菌素、嘌呤霉素等，也用作选择剂，用于选择和建立转染/转基因的细胞。

G-418溶液（遗传霉素）   

G-418（Geneticin，遗传霉素）是一种氨基糖苷类抗生素，在分子遗传实验中，是稳定转染最常用的抗性筛选试剂。G-418可以干扰80S核糖体的功能，并影响真核细胞中蛋白质的合成，主要用于哺乳动物、植物或酵母细胞的选择。G-418对细菌、酵母、高等植物、哺乳动物细胞、原虫和蠕虫均有毒性，其抗性基因为显性表型，在Tn601(903)和Tn5转座子上都有定位。G-418溶液经过滤除菌，一般工作浓度为50～1000ug/ml不等，不同类型的细胞需要根据实验确定最佳浓度。

一般来说，刚开始筛选转化子需要高浓度的G418，并用一个较低浓度的G418用于维持培养。生长条件，细胞类型和其他的环境因素都可能影响G418的用量，因此第一次使用的实验体系建议通过杀灭曲线(kill curve)，即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。通常情况，哺乳动物细胞筛选范围200-2000μg/mL；植物细胞：10-100μg/mL；酵母细胞：500-1000μg/mL；网柄菌属：10-100μg/mL。

潮霉素B    

潮霉素B(Hygromycin B)，从吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)分离到的一种氨基糖苷类抗生素。通过与30S核糖体亚基结合，诱导对mRNA模板的错读且抑制易位，从而以阻止蛋白合成。潮霉素B能杀死细菌、真菌和高等真核细胞。主要用来筛选和维持培养稳定转染 Hph 载体的原核细胞或真核细胞（植物细胞和哺乳动物细胞）。

潮霉素B用来筛选稳定转染细胞株的工作浓度需要根据细胞类型、培养基、生长条件和细胞代谢率而变化。

? 哺乳动物细胞使用浓度：50-1000μg/mL，常用筛选浓度为200μg/mL，最佳浓度需要杀灭曲线来确定；
? 植物细胞常用浓度：20-200μg/mL；
? 细菌常用浓度：20-200μg/mL；
? 真菌常用浓度：200-1000μg/mL。

杀稻瘟菌素S（灭瘟素）溶液   

杀稻瘟菌素(Blasticidin S)，也称为灭瘟素S盐酸盐，稻瘟散，从灰色链霉菌Streptomyces griseochromogenes分离到的一种核苷肽类抗生素。主要通过干扰核糖体中肽键的形成来特异性抑制原核和真核细胞的蛋白质合成。杀稻瘟菌素S用于筛选携带bsr或BSD基因的转染细胞。杀稻瘟菌素S具有快速而强效的作用模式，一个星期内完成阳性克隆的筛选，且很低的抗生素浓度便能导致细胞迅速死亡。Blasticidin S为溶于HEPES buffer，pH 7.5的无菌溶液，浓度为10mg/mL。用于细菌筛选的常用浓度为25-100μg/mL，用于哺乳动物细胞筛选的常用浓度为1-50μg/mL，初次实验建议通过灭杀曲线来确定最佳使用浓度。

链脲菌素   

链脲菌素(Streptozocin)是一种广谱抗生素，具有抗菌、抗肿瘤的性能，能抑制肿瘤细胞DNA合成，并能抑制嘧啶核苷代谢和糖原异生的某些关键酶。在体内，链脲菌素能自发分解并产生引起DNA双链交联的甲基碳化离子，是一种DNA甲基化的诱导剂。还具有诱发糖尿病的作用，该药对动物的胰岛β细胞具有高度选择性的毒性作用，因其操作简单、成模快、模型稳定性好等优点，现已被广泛应用于糖尿病动物模型的构建。

盐酸万古霉素   

盐酸万古霉素(Vancomycin hydrochloride)是一种可在肽聚糖生物合成水平阻断细菌细胞壁生物合成的糖肽抗生素，为窄谱抗生素，仅对革兰氏阳性菌有效；是通过抑制易感细菌的细胞壁合成的第二阶段起作用，还可改变细胞膜的渗透性并选择性地抑制核糖核酸的合成。

渥曼青霉素   

渥曼青霉素(Wortmannin)无明显的抗细菌作用，但具有很强的抑制真菌活性。是一种有效的，不可逆的，选择性PI3K抑制剂。还可以抑制自噬体的形成，并有效抑制DNA-PK/ATM和Polo-like kinase 1 (PLK1)。Wortmannin通过对PI3K/Akt信号传导途径的抑制，能够提高辐射或者去血清培养诱导的细胞凋亡效果，也能阻止细胞因子的抗细胞凋亡作用。Wortmannin对PI3K的抑制作用也可以阻止由胰岛素受体活化引起的许多短期代谢效应。

硫酸博莱霉素   

硫酸博来霉素(Bleomycin Sulfate)是一类水溶性碱性糖肽类抗生素。主要抑制胸腺嘧啶核苷参入DNA，与DNA结合使之破坏分解，作用于增殖细胞周期的S期。是具有有效抗肿瘤活性的DNA合成抑制剂。可用于抗性筛选和诱导肺纤维化模型。

嘌呤霉素二盐酸盐   

嘌呤霉素(Puromycin)是一种氨基糖苷类抗生素，能有效抑制革兰氏阳性菌生长，还能抑制原生生物、藻类、哺乳动物和昆虫细胞的生长，一般2天内能杀死99%的细胞。其作用机制在于：嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的结构类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸肽链中，导致肽链合成的永久终止，进而阻止蛋白质合成。嘌呤霉素还具有抗肿瘤活性。作为蛋白合成抑制剂，用来研究细胞分化中控制基因顺序表达和协同表达的转录调控机制。

一般情况下，哺乳动物细胞建议工作液浓度1-10μg/ml，最佳浓度使用宿主细胞杀灭实验（杀灭曲线）来确定；大肠杆菌的LB琼脂培养基筛选敏感转化实验，建议工作液浓度为100-125μg/ml。使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌阳性转化子不仅需精确的pH值调节，而且受宿主细胞本身状态影响。

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