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类器官疑难问题知多少?一起来看看

2023-11-06

Q1:转移性的癌类器官,是用转移部位的癌类器官培养基还是原发部位的癌类器官培养基比较好?

答:我们查阅大量文献,构建原发肿瘤和转移癌的类器官都是用的适合原发肿瘤的类器官培养基,比如肠癌的原发灶和转移灶,乳腺癌的原发灶与转移灶,所以用原发部位的癌类器官培养基比较好。

 

Q2:转移性的类器官形态和转移部位的癌类器官长得像还是和原发部位的癌类器官长得像?

答:转移性的类器官形态和原发性的比较像

 

Q3:做胰腺癌类器官药筛,对于加药时,类器官的大小有推荐吗?或者说铺板几天后加药比较好呢?

答:类器官长的比较大的话,50-100um之间加药就可以了;长的比较小的类器官50um左右就行了。一般传代后2-3天,就可以加药,加药再培养3-4天可以检测

 

Q4:制作类器官石蜡包埋实验时,琼脂糖包埋以后,想第二天做石蜡包埋,如何保存比较好?

答:直接放在冰上30min,凝固后直接放在70%乙醇里,4℃过夜

 

Q5:如果取来的组织暂时不能做类器官培养,怎样保存比较好?

答:可以用组织冻存液梯度冻存放液氮,等条件成熟再复苏培养即可

 

Q6:关于脑脊液中肿瘤细胞的提取办法?

答:和恶性积液的方法类似,离心回收细胞,包埋基质胶,加类器官培养基

 

Q7:肠类器官出现污染还能拯救吗?

答:不管是哪种污染,细菌,霉菌,类器官都必须舍弃,同时往培养皿中倒入84等消杀试剂,防止传播

 

Q8:肝癌类器官中混进去胆管癌类器官,能否通过流式分选将其分开?

答:流式分选是可以的,也直接挑取你要的类器官扩增即可。一般类器官长到100um肉眼是可见的,直接超净台上,使用200μL移液枪头直接挑下来类器官,然后进行传代操作

 

Q9:做药敏实验,每次铺板实验组和对照组数量刚种进去差不多,成球数量完全不一样,怎么办呢?

答:所以一般铺板后,不会马上做药筛,会养1~2轮换液周期(3~6天)从新评估各个孔的情况,选取合适的孔做实验

 

Q10:做药敏实验,加药之后几天测ATP比较好?

答:有些24h,有些48h,比如化疗药,每种药的时间点是不一样的,要根据自己要做的药物,摸一下时间梯度

 

Q11:肝实质癌类器官为什么培养成功率低?

答:排除掉培养操作技能的影响,肝实质癌类器官,对于未治疗的肝癌组织培养成功率相比治疗过的成功率高,可能经过治疗后的肝癌细胞活性降低,同时也和营养体系的优化等有一定关系。

 

今天讲解就到这了,大家如有实验问题,欢迎入群交流哦!



 

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