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2024-04-17

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文献信息

题目：Regulation of the migration of colorectal cancer stem cells via the TLR4/MyD88 signaling pathway by the novel surface marker CD14 following LPS stimulation

杂志：Oncology Letters 27.2 (2024): 60.

作者：Li Y, Shi J, Liu Z, et al

DOI：https://doi.org/10.3892/ol.2023.14194

图文献引用产品信息

研究背景

结直肠癌(CRC)是全球癌症相关死亡的主要原因之一，主要原因与CRC干细胞(CCSCs)引起的术后癌症复发、转移或癌细胞耐药有关，CCSCs缺乏一致和可靠的标记物限制了它们在临床实践中的使用。为了启动促炎反应，脂多糖(LPS)和CD14（单核细胞、巨噬细胞和中性粒细胞的一种特殊表面标志物）通过Toll样受体4(TLR4)信号通路相互作用，此外，脂多糖通过TLR4信号通路促进结直肠癌的发展和转移，CD14与肿瘤的复发、生长、转移和治疗耐药有关，这与CSC的特征（如复发、生长、转移和耐药）是一致的，这表明CD14可能与CCSCs相关。

研究方法

本研究采用免疫荧光双标记法检测CD133和CD14，定量评估结直肠癌组织和癌旁组织石蜡包埋切片CCSCs中CD14的表达。随后，从结直肠癌组织中提取CD14+细胞，通过分析增殖、肿瘤亲和性和治疗耐药性来检测其干性特征，以证实表型鉴定。此外，迁移的体外检测能够检测CD14的功能。

研究结果

1、癌旁组织相比，所有结直肠癌组织中CD14和CD133共表达的阳性率均显著升高。

图 CD14在CD133标记的结直肠csc中表达

2、EdU和CCK-8检测结果显示结肠癌CD14+细胞表现出更强的增殖能力。

图结肠癌CD14+细胞表现出增强的增殖能力

（CCK-8购自爱必信abs50003 CCK-8试剂盒）

3、细胞克隆实验表明，与CD14-细胞相比，CD14+细胞更大，核分裂增加，聚集成簇。用裸鼠异种移植实验表明植入45天后，CD14+细胞组的肿瘤明显大于CD14-细胞组。

图 CD14+细胞在结肠癌中具有致瘤性

4、耐药性分析。CD14+组和CD14-组细胞的IC50分别为2.554和17.02mg/L，表明与阴性组相比，阳性组的耐药性增加。

图 CCK-8测定5-FU对CD14+和CD14-细胞48h的IC50效应曲线

5、Transwell实验结果显示，与对照组相比，内毒素组表现出更强的迁移能力，而内毒素+中和抗体组的迁移能力比对照组更强（图A）。创面愈合实验表明，内毒素组的细胞迁移能力明显高于内毒素+中和抗体组（图B）。RT-qPCR结果显示MyD88基因表达水平以内毒素组最高（图C），Western blotting显示TLR4和MyD88蛋白的表达在内毒素+中和抗体组和内毒素组均显著高于对照组，其中内毒素组的增加更明显（图D）。

图内毒素影响细胞迁移

（RIPA裂解液abs9229、彩色PAGE快速凝胶试剂盒(10%)abs9367、ECL化学发光检测试剂盒abs920、 TLR4抗体abs132000、MyD88抗体abs135682、LPSabs47014848、细胞快速RNA提取试剂盒abs60027）

常规裂解液对比

品名	RIPA裂解液（弱）	RIPA裂解液（中）	RIPA裂解液（强）
货号-规格	abs9230-100mL	abs9228-100mL	abs9229-100mL
成分表	50mM Tris-HC(pH7.4)	50mM Tris-HC(pH7.4)	50mM Tris-HC(pH7.4)
	150mM NaCl	150mM NaCl	150mM NaCl
	1%NP-40	1%NP-40	1%Triton X-100
	0.25% 脱氧胆酸钠	0.5% 脱氧胆酸钠	1% 脱氧胆酸钠
		0.1% SDS	0.1% SDS
	以及正钒酸钠，氟化钠，EDTA和抑肽酶等多种抑制剂	以及正钒酸钠，氟化钠，EDTA和抑肽酶等多种抑制剂	以及正钒酸钠，氟化钠，EDTA和抑肽酶等多种抑制剂
特点	不含高浓度去垢剂	有较高浓度的去垢剂，不适合用Bradford法来测定总蛋白浓度	有较高浓度的去垢剂，不适合用Bradford法来测定总蛋白浓度
裂解强度	温和	中	强
膜蛋白	一般	较好	很好
胞浆蛋白	很好	很好	很好
核蛋白	较好	较好	很好
应用推荐	WB，IP，Co-IP	WB，IP	WB，IP，Co-IP

本期好物推荐

类别	货号	产品名称	规格
样本处理	abs9346	细胞浆、细胞核及细胞膜蛋白抽提试剂盒	50T
	abs9116	免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液	100mL
	abs9162	广谱型磷酸酶抑制剂混合物(100×储液)	1mL
	abs9161	广谱型蛋白酶抑制剂混合物(不含EDTA,100×DMSO储液)	1mL
蛋白定量	abs9232	BCA蛋白定量试剂盒	500T
胶	配胶试剂盒、Glass gel预制胶、Plastic gel预制胶、abs93系列预制胶
上样与电泳	abs953	上样缓冲液(2×)	10mL
	abs9829	上样缓冲液(5×)	10mL
	abs951	电泳液(10×)	100mL
	abs923	预染蛋白Marker(10-245kDa)	500uL
转膜	abs932	PVDF膜(0.45μm)	20张
	abs960	NC膜(0.45μm)	20张
	abs950	电转液(10×)	100mL
封闭	abs9175	脱脂奶粉	500g
封闭	abs9157	牛血清白蛋白	100g
抗体稀释与去除	abs954	WB专用一抗二抗稀释液	100mL
抗体稀释与去除	abs967	Western一抗二抗去除液(强碱性)	500mL
显色与检测	abs920	ECL化学发光检测试剂盒	25mL×2

Absin产品线：
爆款产品：十大试剂盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化检测、残留检测、多因子检测)；细胞培养(类器官试剂盒+基质胶，胎牛血清+培养添加剂+细胞因子)、分化试剂盒；分子(mRNA合成服务+提取试剂盒)；化合物大包装；辅助试剂、耗材/仪器、定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)...
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