做了这么多年的分子实验,对于其中的工具酶大家都了解吗?他们的作用原理都知道吗?本期Absin分子小课堂小爱要教大家如何分清这些复杂的酶。
工具酶是一类在DNA重组过程中,用于不同DNA分子的制备、切割、修饰、扩增、核酸分子的标记以及核苷酸序列测定的酶的统称,是基因重组技术不可缺少的工具。根据催化反应特性可分为限制性内切酶、聚合酶、连接酶、逆转录酶等多种类型。
限制性内切酶
限制性内切酶主要从原核生物中发现,以内切方式水解核酸中磷酸二酯键,对外源性的DNA进行切割、水解,被称为“基因剪刀”。限制酶来源于细菌的“限制—修饰”系统,最早发现于20世纪60年代末。根据限制酶的结构与作用方式,可将其分为Ⅰ类限制酶(TypeⅠ)、Ⅱ类限制酶(TypeⅡ)和Ⅲ类限制酶(TypeⅢ)3种类型。其中,Ⅱ类限制酶识别切割位点比较专一,且不具有甲基化酶的活性,在DNA重组中被广泛应用。
爱必信拥有不同的TypeⅡ型限制性内切酶产品:
产品优势:
1、快速:5-15min内即可完成酶切;
2、便捷:共用一种酶切Buffer,简化酶切体系;
3、兼容性高:在不同缓冲液中均具有极高活性;
4、良好酶活冗余度,轻松应对底物过量或困难模板酶切。
货号 |
产品名称 |
规格 |
abs60200 |
快速内切酶ApaLI |
200T |
abs60201 |
快速内切酶AscI |
50T |
abs60202 |
快速内切酶AvrII |
25T |
abs60203 |
快速内切酶BamHI |
500T |
abs60204 |
快速内切酶BclI |
125T |
abs60205 |
快速内切酶BglII |
100T |
abs60206 |
快速内切酶BsaI |
50T |
abs60207 |
快速内切酶BstBI |
100T |
abs60208 |
快速内切酶BstEII |
100T |
abs60209 |
快速内切酶ClaI |
50T |
DNA连接酶
DNA连接酶主要用于基因工程中,将由限制性核酸内切酶“剪”出的粘性末端重新组,故也称“基因针线”。作用原理为DNA连接酶催化双链DNA链一条链上切口的连接,借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5'-Po4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键。T4 DNA连接酶是ATP依赖的DNA连接酶,可催化双链DNA的粘性末端、平末端及RNA-DNA杂合体中单链的连接,在分子生物学中有广泛的应用。
货号 |
产品名称 |
规格 |
特点 |
abs60084 |
T4 DNA Ligase |
500U |
该酶不仅能够催化双链DNA的平末端或粘性末端之间的连接,还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切刻。 |
DNA聚合酶(DNA polymerase)
DNA聚合酶以DNA为复制模板,从将DNA由5'端点开始复制到3'端的酶。DNA聚合酶的主要活性是催化DNA的合成(在具备模板、引物、dNTP等的情况下)及其相辅的活性。实验室常用的DNA聚合酶有普通耐热型Taq DNA聚合酶、高保真型DNA聚合酶。
货号 |
产品名称 |
规格 |
abs60251 |
重组高热稳定DNA聚合酶 |
1000U |
abs60036 |
2×Taq PCR Mix |
1mL*5 |
abs60056 |
2×Pfu Master Mix |
1mL*5 |
abs601511 |
2 × 预混实时荧光定量快速PCR反应体系 |
1.7mL*3 |
逆转录酶
逆转录酶(反转录酶)又称为依赖RNA的DNA聚合酶。该酶以RNA为模板,以dNTP为底物,根据碱基配对的原则,按5'-3'方向合成一条与RNA模板互补的DNA单链,这条DNA单链叫做互补DNA (complementary DNA, CDNA)。
货号 |
产品名称 |
规格 |
产品特点 |
abs60073 |
Reverse Transcriptase |
10000U |
本酶的RNase H活性缺失,延伸能力强,可用于较长的cDNA合成,高比例的全长cDNA文库的构建以及Real Time RT-PCR反应等。 |
核酸酶
核酸酶主要有三类,分别是:
1、脱氧核糖核酸酶(DNase):DNase只能水解DNA的磷酸二酯键。胰DNasel可切割双链和单链DNA,产物为5’-磷酸寡核首酸,牛脾DNasell降解DNA则产生3’-磷酸为未端的寡核苷酸;
2、核糖核酸酶(RNase):将RNA降解为小片段的核酸酶;
3、非特异性核酸酶:将DNA、RNA都可进行水解。
货号 |
产品名称 |
规格 |
abs60539 |
脱氧核糖核酸酶Ⅰ |
1KU |
abs47047435 |
脱氧核糖核酸酶Ⅰ(牛胰) |
100mg |
abs9330 |
核糖核酸酶A |
150uL |
abs44075580 |
核糖核酸酶A |
50mg |
abs60326 |
DNase–Free RNA酶A |
1mL |
abs60157 |
全能核酸酶 |
10KU |
其他酶
货号 |
产品名称 |
规格 |
产品描述 |
abs60248 |
双链DNA酶 |
50T |
dsDNase也是一种核酸内切酶,能够特异性的消化双链DNA而不会消化单链DNA |
abs60340 |
PfAgo核酸内切酶 |
200U |
PfAgo核酸内切酶可在5’磷酸化的guide DNA引导下精准剪切单链DNA底物 |
abs9118 |
蛋白酶K |
1g |
主要应用于基因诊断试剂盒、基因组DNA提取试剂盒、RNA提取试剂盒中去除核酸酶和其它蛋白污染 |
FAQ:
1、限制性内切酶无法切割DNA有哪些原因?
a. 内切酶失活:用标准底物检测酶活性;
b. DNA不纯,含有SDS、酚、EDTA等内切酶抑制因子:将DNA过柱纯化,乙醇沉淀DNA;
c. 条件不适(试剂、温度):检查反应系统是否最佳;
d. DNA不存在该酶识别序列:换用其它的酶切割DNA或过量酶消化验证。
2、酶切后的DNA片段连接效率低?
a. 含磷酸盐的浓度高:透析,乙醇沉淀去除磷酸盐;
b. 内切酶失活或含有ATP酶:更换内切酶;
c. 平末端连接:加大T4 DNA Ligase用量;
d. 连接缓冲液不合适:重新配制连接缓冲液。
3、脱氧核糖核酸酶I(abs60539)浓度、体积怎么换算?用于组织的解离该怎么用?
对于浓度、体积计算:本产品规格为1KU,酶活浓度是5U/mL,总体积则为200uL。根据说明书最后一个表格计算酶体积用量:例如1ugRNA,相应所需酶就是1U,1KU/1U=200uL/需要体积,最后计算得到0.2uL。对于动物组织解离,可以适用,具体操作步骤及使用量可参考网络文献。
4、pfAgo核酸内切酶buffer是否含有金属离子?
Buffer中不含金属离子,对于扩增反应没有任何影响。一般PfAgo酶可以兼容绝大多数PCR buffer,但普通Taq酶不兼容PfAgo buffer。
5、pfAgo核酸内切酶和Ago核酸内切酶(微球)有哪些差别?
两者状态不一样、保存条件不一样;检测方法、使用的效果几乎一样。
名词解释:
酶活性单位:在一定温度、PH及离子强度下,1h内完全酶解(切割)特定底物DNA,所需酶的量。采用国际单位(IU,简写为U)来统一表示酶活性的大小。
酶活性浓度:以每单位体积所含的酶活性单位数表示。目前几乎都习惯用U/L来表示液体中酶活性浓度。
Absin产品线:
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