产品上新 | CoIP/Pull down傻傻分不清楚？

产品上新

爱必信互作系列试剂盒上新啦！CoIP和CHIP试剂盒是我们的老角色，上架以来受到各种好评！abs955文献量飞速增长，目前单品已将近200篇，IF最高37.3！CHIP试剂盒文献量也在快速增长中！最近终于！爱必信互作系列新增多款试剂盒！今天给小白浅浅分析一下各种试剂盒的区别。

abs955免疫(共)沉淀(IP/CoIP)试剂盒

表1 爱必信互作试剂盒

DNA pull down

原理：DNA pull down是用于分析蛋白质与DNA互作的一种分析技术。通常用来分析目标基因调控区域相结合的转录因子及其他调控蛋白。

该技术针对目标区域设计特异性DNA探针并经过脱硫生物素标记，标记后探针可以和偶联在磁珠上的链霉亲和素亲和结合，再与总蛋白提取物进行孵育，有互作的蛋白质可以和DNA探针特异性结合，形成磁珠-DNA探针-蛋白复合物，洗涤去除非特异性结合的蛋白质，再经过洗脱得到目的DNA探针-蛋白质复合物，最后通过Western Blot或质谱(MS)鉴定蛋白质类型。多用于特定基因的转录因子研究。

DNA pull down原理图

Chip原理

染色质免疫沉淀(ChIP)是研究体内蛋白质与DNA相互作用的理想技术，是目前研究转录因子与启动子区域间相互联系的较好方法。

在活细胞状态下使细胞内的蛋白质和DNA交联，并用超声波将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段。选择与目的蛋白特异性结合的抗体免疫沉淀DNA-蛋白质复合体，从而特异性地富集与目的蛋白结合的染色体片段。该DNA可用于后续的定量PCR检测(qPCR)或高通量测序(seq)。常用于验证或寻找与已知蛋白结合的DNA序列。

Chip原理图

RNA pull down

RNA pull-down是研究细胞内RNA与蛋白/RNA结合情况的技术。

先将RNA进行标记（如生物素标记），再与细胞裂解液共同孵育，从而形成RNA-RNA/蛋白质复合物，进而检测与之结合的RNA或蛋白质。复合物洗脱后，通过荧光定量PCR(RNA pull down-QPCR)或高通量测序(RNA pull down-seq)方法来鉴定目标RNN是否与某些RNA分子相互作用，通过Western blot(pull down-WB)实验和质谱(pull down--MS)技术检测目标RNA是否与某些蛋白相互作用。

RNA pull down原理

RIP原理

RIP技术(RNA Binding Protein lmmunoprecipitation, RNA结合蛋白免疫沉淀)，是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术，是了解转录后调控网络动态过程的有力工具。

该技术主要是运用目标蛋白的特异性抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来，然后经过分离纯化对结合在复合物上的RNA进行q-PCR验证或高通量测序分析。

RIP原理图

GST Pull-Down试剂盒

GST Pull-Down实验是验证体外蛋白互作的主要方式。通过体外表达亲和蛋白-GST，将亲和蛋白固化在谷胱甘肽亲和树脂上充当“诱饵蛋白”，将细胞或者组织的总蛋白和此“诱导蛋白”混合孵育后可从中捕获“目标蛋白”，最后通过洗脱的方式将“目标蛋白”洗脱后检测，就可以分析蛋白和蛋白互作关系。

GST Pull-Down原理图

CoIP原理

免疫(共)沉淀(IP/CoIP)是基于抗体和蛋白的特异性亲和作用，通过捕获与蛋白或抗原特异性结合的抗体，进而从复杂的样品中捕获及富集目标蛋白，同时可以测定与之相互作用的蛋白或其它生物大分子。

CoIP原理图

当无法进行体内互作检测或无法获得在体样本或者在体样本没有特异性一抗可以使用但是又必须进一步验证蛋白互作结论时，可用到GST pull down实验；

总结

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