脂质染色 | 脂滴&胆固醇染色技术全攻略

脂质是一类广泛存在于生物体中的有机分子，它们在细胞的结构和功能中扮演着重要角色。脂滴和胆固醇是脂质的不同形式，它们在结构和功能上有所不同。脂滴是中性脂的主要贮存场所，包括脂酰甘油和酯化胆固醇。在病理情况下，如器官发生脂肪变性，细胞内可能出现脂滴增多，通过脂肪染色能将这些脂滴清晰的显现出来。胆固醇是真核细胞细胞膜的重要成分，能够维持膜结构完整性，调节膜流动性，参与信号转导，在动脉硬化、Ｃ型尼曼匹克病(Niemann-Pick disease type C, NPC)、阿尔茨海默病等疾病的发生发展过程中起着重要作用。

脂滴和胆固醇的染色是病理学和细胞生物学研究中的重要技术，用于观察和量化细胞内脂质的积累。目前，脂滴染色使用最广泛的染料包括油红O(Oil Red O)、尼罗红(Nile Red)、苏丹染料(Sudan Dyes)等。胆固醇染色使用最多的染料是菲律平(Filipin III)，Filipin已被广泛应用30余年。它可用于标记生物膜结构上及非细胞结构内的自由胆固醇，也能配合应用胆固醇酯化酶，使胆固醇酯水解成自由胆固醇而间接显色。

接下来，小爱就给大家详细介绍脂滴和胆固醇的染色方法。

一、脂滴染色

1、组织切片脂滴油红O(abs42024259)染色

1）实验原理

油红O属于偶氮染料，是很强的脂溶剂和染脂剂，与甘油三酯结合呈小脂滴状。脂溶性染料能溶于组织和细胞中的脂类，它在脂类中的溶解度比在溶剂中大。当组织切片置入染液时，染料则离开染液而溶于组织内的脂质（如脂滴）中，使组织内的脂滴呈橘红色。

2）染色步骤^[1]

① 油红O染色液配制：

a.母液准备：称取1g油红O，加入100mL异内醇配置成储存液，棕色瓶4℃密封保存。

b.工作液准备：使用前加双蒸水稀释至60%，滤纸过滤后使用。

② 用冰冻切片机切取5μm厚的肝组织切片；

③ 用95%乙醇固定，蒸馏水清洗1min，60%异丙醇浸泡30min；

④ 再用60%油红O染色溶液处理10min和15min，蒸馏水冲洗1min；

⑤ 苏木素复染，用自来水清洗1~3min，光镜下观察肝细胞脂质沉积情况。

3）肝组织油红O染色结果图：

（注：图片来源于文献[1]）

2、细胞脂滴尼罗红(abs9114)染色（以下染色方法仅供参考）

1）实验原理

尼罗红是一种亲脂性荧光染色剂，它是一类环境敏感性荧光染料，能够在富含脂质的环境中产生强烈的荧光，而在水性介质中的荧光强度极小，这种特性使得它成为了一款极重要检测细胞内脂滴的荧光指示剂，可以通过荧光显微镜和流式细胞检测结果。

2）染色步骤

① 尼罗红染色液配制：

a.母液准备：取适量的尼罗红（Mw：318.37g/mol）用无水DMSO充分溶解制备1mM储存液，按照单次用量分装冻存，避免反复冻融，避光保存。

b.工作液准备：用HHBS或生理缓冲液(pH 7.0)将母液按1:1000稀释为1×尼罗红工作液，漩涡混匀。

【注意】：

尼罗红的实际染色浓度请参考文献或实验室体系来调整。以上只做参考。

② 用检测化合物处理细胞一段时间；

③ 离心并调整细胞浓度为1-5×10⁵cell/管；

④ 用500μL尼罗红工作液重悬细胞；

⑤ 室温或37oC避光孵育5-10min；

⑥ 吸掉染色工作液，用HHBS或适当缓冲液清洗细胞；

⑦ 用500μL预热的HHBS或培养基重悬细胞，使细胞密度为1-5×10⁵cell/管；

⑧ 荧光显微镜或流式细胞仪检测荧光信号，Ex/Em=552/636nm。

【注意】：

① 对于贴壁细胞，可用HHBS或适当缓冲液清洗细胞，然后直接加入尼罗红工作液孵育；

② 细胞也可预固定，然后用尼罗红工作液染色。

二、胆固醇染色

细胞胆固醇菲律平(Filipin III, abs42018484)染色

1）实验原理

菲律平的主要成分是Filipin III，它可以特异性地与游离胆固醇相互作用，而不与酯化的胆固醇结合。这种特异性结合是由于菲律平分子结构中包含多个共轭双键，使其能够与胆固醇分子的疏水部分形成复合物。当Filipin III与游离胆固醇结合后，其激发光谱波峰约在360nm处，发射光谱波峰约在480nm处。通过检测这些特定波长附近的荧光信号，可以表征细胞内的胆固醇含量。

2）染色步骤^[2]

① 菲律平染色液配制：

a.母液准备：1mg菲律平粉末中加入1mL DMSO，完全溶解配置成1mg/mL储存液，按照单次用量分装冻存，避免反复冻融，避光保存。

b.工作液准备：使用前，取适量母液加入到PBS中，稀释成一定浓度的工作液（如0.1mg/mL）备用。

② 将细胞接种于盖玻片中，培养12-18h；

③ 用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤3次后，在室温下用4%多聚甲醛固定20min；

④ 室温下用0.1mg/mL菲律平III处理细胞30min；

⑤ 细胞再用0.35μg/mL碘化丙啶(PI)染色5min；

⑥ 最后，用共聚焦激光扫描显微镜在405nm处检测菲律平和PI染色的荧光强度。

3）星形胶质细胞/神经元细胞菲律平染色结果图

（注：图片来源于文献[2]）

爱必信（上海）生物科技有限公司可为科研人员提供非常全面的细胞结构（如细胞膜、细胞质、细胞核、细胞骨架、线粒体、溶酶体、外泌体、内质网等）染色相关染料。关于脂质染色，小爱今天就介绍到这里。下期小爱将为大家介绍外泌体的标记技术，感兴趣的老师记得关注我们呦！

参考文献

[1] Ji X, Ma Q, Wang X, et al. Digeda-4 decoction and its disassembled prescriptions improve dyslipidemia and apoptosis by regulating AMPK/SIRT1 pathway on tyloxapol-induced nonalcoholic fatty liver disease in mice[J]. J Ethnopharmacol. 2023;317:116827.

[2] Huang Y, Zhang W, Guo X, et al. Cellular cholesterol loss by DHCR24 knockdown leads to Aβ production by changing APP intracellular localization[J]. J Lipid Res. 2023;64(5):100367.

脂质染色产品推荐：

货号	产品名称	λEx/λEm (nm)	产品描述
abs42018484	菲律平	360/480	测定未酯化胆固醇水平。
abs42024259	油红O	628/684	细胞脂滴染色；组织切片脂质染色。
abs42027851	苏丹Ⅳ	255/355	对组织切片脂类、甘油三酯、脂蛋白染色。
abs9114	尼罗红	552/636	测定细胞内的脂肪滴。
abs9214	苏木素染液	—	组织学中用于细胞核的染色。
abs9358	PI染色液(红色)	535/617	细胞核染色，胆固醇染色中常与菲律平搭配使用。

荧光染料产品推荐：

货号	产品名称	λEx/λEm (nm)	产品描述
abs45153674	DiO 高氯酸盐(绿色)	484/501	活细胞示踪、细胞膜染色
abs47048165	DiD 对氯苯磺酸盐(红色)	644/663	活细胞示踪、细胞膜染色
abs80001	霍乱毒素B亚单位(CTB)	—	神经示踪剂
abs80003	霍乱毒素B亚单位-FITC	494/520	神经示踪剂
abs45153692	DiR 碘化物(深红色)	748/780	动物活体成像
abs42075819	D-荧光素钾盐	—	动物活体成像
abs47048270	罗丹明标记鬼笔环肽(橙红)	540/565	细胞骨架染色(F-action)
abs47048271	鬼笔环肽-Fluor 488(绿色)	493/517	细胞骨架染色(F-action)
abs47048272	鬼笔环肽-Fluor 555(橙红)	556/574	细胞骨架染色(F-action)
abs47014944	钙黄绿素红(红色)	560/574	细胞质染色
abs9106	CFSE(绿色)	492/517	细胞质染色
abs42006041	DASPEI	550/573	线粒体染色
abs9103	JC-1	585/590	线粒体膜电位检测
abs47038870	溶酶体绿色荧光探针	504/511	溶酶体染色
abs47038871	溶酶体红色荧光探针	577/590	溶酶体染色
abs9819	PKH26红色荧光细胞连接试剂盒	551/567	外泌体染色
abs9820	PKH67绿色荧光细胞连接试剂盒	490/502	外泌体染色
abs47038874	内质网绿色荧光探针	489/520	内质网染色
abs47038875	内质网红色荧光探针	587/615	内质网染色
abs47047616	DAPI染色液(蓝色)	364/454	细胞核染色
abs813337	Hoechst 33342(蓝色)	350/461	细胞核染色
abs9104	7-AAD(红色)	545/650	细胞核染色
abs9358	PI染色液(红色)	535/617	细胞核染色
abs45153639	Fluo 3-AM	506/526	钙离子(Ca2+)探针
abs42197174	DCFH-DA	502/523	活性氧(ROS)探针
abs42016243	DAF-2 DA	491/513	一氧化氮(NO)探针
abs47044989	WSP-1	465/515	硫化氢(H2S)探针

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