抗体亲和纯化填料解决方案

2025-02-14

一、背景介绍

◆ 蛋白A是???葡萄球菌的细胞壁中的表?蛋?，它由折叠成三螺旋束的五个同源Ig结合域组成；

◆ 蛋白G是G、C型链球菌细胞壁中的?种蛋?质；

◆ 蛋白A/G是重组蛋?A蛋?G融合蛋?，融合了来?蛋?A的5个Fc结合域和蛋?G的3个Fc结合域；

◆ 蛋白L来源于?消化链球菌，并通过L链相互作?与免疫球蛋?结合。

图1 抗体与抗体亲和配基的作用区域

表1 蛋白A、G、L的抗体亲和性差异分析

	蛋白A	蛋白G	蛋白A/G	蛋白L
优点	结合位点在CH2和CH3结构域之间的Fc区域，以及? VH3家族的Fab区内的重链	可以特异性地同免疫球蛋?IgG分?的Fc段结合?不影响其Fab段与抗原分?结合的能?	可以与?的所有IgG亚型、IgA、IgE、IgM结合。蛋?A/G降低了对pH的依赖，允许在pH 5-8进?结合	只与抗体的κ轻链结合?不会影响抗体的抗原结合位点。可以结合更?泛的抗体类别，如?类的IgG、IgM、IgA、IgE、IgD，以及含κ轻链(?类1,3,4型，??1型)的Fab、scFv等抗体?段
缺点			不能与??的IgA、IgM和?清?蛋?结合	不结合?、??或绵?来源的免疫球蛋?
应用	免疫球蛋?的纯化、固定或检测领域	从?清中分离并纯化或去除IgG、单克隆抗体的纯化和抗原抗体复合物的分离等	?IgG单抗的提取和检测	从添加BSA或FCS的培养液中纯化单克隆抗体，也?泛?于基因改造?程化抗体的纯化分离

表2 抗体亲和配基与不同来源及亚型抗体之间的亲和?

种类	亚型	蛋白A	蛋白G	蛋白A/G	蛋白L
人	IgG1	+++	+++	+++	+++
	IgG2	+++	+++	+++	+++
	IgG3	+	+++	+++	+++
	IgG4	+++	+++	+++	+++
	IgM	+	-	+	+++
	IgD	-	-	-	+++
	IgA	+	-	+	+++
	Fab	+	+	+	+++
小鼠	IgG1	+	++	++	+++
	IgG2a	+++	+++	+++	+++
	IgG2b	+++	+++	+++	+++
	IgG3	+++	+++	+++	+++
	IgM	-	-	-	+++
大鼠	IgG1	+	++	++	+++
	IgG2a	-	+++	+++	+++
	IgG2b	-	+	+	+++
	IgG2c	+++	+++	+++	+++
牛	IgG1	+	+++	+++	-
牛	IgG2	+++	+++	+++	-
山羊	IgG1	+	+++	+++	-
山羊	IgG2	+++	+++	+++	-
马	IgG(ab)	+	-	+	NA
	IgG(c)	+	-	+	NA
	IgG(T)	-	+++	+++	NA
兔	IgG	+++	+++	+++	+
猪	IgG	+++	+	+++	+++
狗	IgG	+++	+	+++	NA
鸡	IgY	-	-	-	-

注：- 表示不包含；+ 表示中标组合；+++ 表示错误组合；NA 表示不适用或数据不可用。

二、抗体亲和纯化填料参数

类别	重组蛋白A琼脂糖凝胶FF	重组蛋白G琼脂糖凝胶FF	重耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF	蛋白A/G琼脂糖凝胶FF	重组蛋白L琼脂糖凝胶FF
基质	4%交联琼脂糖	4%交联琼脂糖	4%交联琼脂糖	4%交联琼脂糖	4%交联琼脂糖
配基	重组金黄色葡萄球菌蛋白A，≥6mg/mL	重组链球菌蛋白G，≥6mg/mL，单点偶联	重组耐碱蛋白A，≥6mg/mL	蛋白A蛋白G融合蛋白，≥6mg/mL	重组大消化链球菌蛋白L，≥6 mg/mL
粒径范围^a	45-165μm
平均粒径	~90μm
动态结合载量^b	≥40mg h-IgG/mL	≥40mg h-IgG/mL	≥45mg h-IgG/mL	≥40mg h-IgG/mL	≥40mg k轻链h-IgG/mL
推荐工作流速^c	60-300cm/h	60-300cm/h	60-300cm/h	60-150cm/h	60-300cm/h
最大流速与压力^d	＞900cm/h
使用 pH	3-10(推荐的工作pH),3-12(短期稳定)	3-9(推荐的工作pH),2-10(短期稳定)	3-10(推荐的工作pH),3-12(短期稳定)	3-10(推荐的工作pH),3-12(短期稳定)	2-9(推荐的工作pH),15mM NaOH(CIP)
化学稳定性	在以下溶液中稳定：常用的水相缓冲液、10-100mmol/L NaOH、6mol/L盐酸胍、70%乙醇。	在以下溶液中稳定：常用的水相缓冲液、6mol/L盐酸胍、70%乙醇。	在以下溶液中稳定：常用的水相缓冲液、0.1-0.5mol/L氢氧化钠、6 mol/L盐酸胍、70%乙醇等。	在以下溶液中稳定：常用的水相缓冲液、0.1-0.5mol/L氢氧化钠、6mol/L 盐酸胍、70%乙醇等。	在以下溶液中稳定：常用的水相缓冲液、6mol/L盐酸胍、70% 乙醇。

注：

a：90%体积以上的微球在此粒径范围；

b：DBC10%测试条件为：10%流穿，6min停留时间；

c：推荐流速是指该流速可满足大部分柱高下2-6min停留时间的使用条件，并非只能在该流速范围内工作；

d：10cm柱高下的最大测试流速。

三、应用数据

图2 工艺溶剂稳定性

图3 不同蛋?A填料对NaOH的耐受性

图4 不同蛋?G填料的洗脱曲线，样品为h-IgG

图5 填料：重耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF(中压预装柱)(Cat: abs91003-M)；

样品：牛血清，相对于填料约20mg IgG/mL填料；

上样、结合缓冲液： 20mM PB, 150mM NaCl, pH7.4, 10CV；

洗脱缓冲液：100mM甘氨酸，pH3.0，14CV；

在位清洗(CIP)：100mM NaOH，10CV

四、爱必信抗体亲和纯化填料产品信息

货号	产品名称	规格
abs91001-F	重组蛋白A琼脂糖凝胶FF	10mL/100mL
abs91001-G	重组蛋白A琼脂糖凝胶FF(重力预装柱)	1mL/5mL
abs91001-M	重组蛋白A琼脂糖凝胶FF(中压预装柱)	1mL/5mL
abs91002-F	重组蛋白G琼脂糖凝胶FF	10mL/100mL
abs91002-G	重组蛋白G琼脂糖凝胶FF(重力预装柱)	1mL/5mL
abs91002-M	重组蛋白G琼脂糖凝胶FF(中压预装柱)	1mL/5mL
abs91003-F	重耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF	10mL/100mL
abs91003-M	重耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF(中压预装柱)	1mL/5mL
abs91003-G	重耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF(重力预装柱)	1mL/5mL
abs91004-F	蛋白A/G琼脂糖凝胶FF	10mL/100mL
abs91004-M	蛋白A/G琼脂糖凝胶FF(中压预装柱)	1mL/5mL
abs91004-G	蛋白A/G琼脂糖凝胶FF(重力预装柱)	1mL/5mL
abs91005-F	易洗脱蛋白G琼脂糖凝胶FF	10mL/100mL
abs91005-M	易洗脱蛋白G琼脂糖凝胶FF(中压预装柱)	1mL/5mL
abs91005-G	易洗脱蛋白G琼脂糖凝胶FF(重力预装柱)	1mL/5mL
abs91006-F	重组蛋白L琼脂糖凝胶FF	10mL/100mL
abs91006-M	重组蛋白L琼脂糖凝胶FF(中压预装柱)	1mL/5mL
abs91006-G	重组蛋白L琼脂糖凝胶FF(重力预装柱)	1mL/5mL

参考文献

[1] Arora S, Saxena V, Ayyar BV. Affinity chromatography: A versatile technique for antibody purification. Methods. 2017 Mar 1;116:84-94. doi: 10.1016/j.ymeth.2016.12.010. Epub 2016 Dec 22. PMID: 28012937.

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