LNP递送mRNA，转染So easy！

2025-03-21

背景介绍

裸露的RNA是带负电荷的亲水性大分子，因为细胞膜的静电排斥，难以进入细胞，且易被无处不在的RNA酶快速降解，所以需要保护性外壳才能进入细胞。细胞膜的组成主要是脂质，利用脂质囊泡包封RNA穿过细胞膜并将RNA释放到细胞质中。囊泡应该是一种带正电的脂质，才能够结合带负电的RNA。

然而，由永久性阳离子脂质组成的囊泡由于能与带负电的细胞膜发生静电作用而引起细胞毒性，脂质结构才能够对内体酸性环境响应而带正电荷的分子。

脂质纳米粒结构

LNP通常由四种关键成分组成：可离子化的阳离子脂质、磷脂（两性离子脂质）(PL)、胆固醇和PEG化脂质。

脂质纳米粒递送机制

脂质纳米粒(LNP)作为mRNA的传递系统，其作用机制涉及多个步骤，确保mRNA安全有效地递送到目标细胞并表达蛋白。在LNP中，可电离的阳离子脂质发挥着重要作用，因为它可以带正电荷低于其Ka以介导在自组装成LNP期间负载带负电荷的RNA，在中性pH下不带电以最大限度地减少毒性，并在细胞吸收后再次带正电荷以促进内体逃逸随着内体pH降低。胆固醇和PEG脂质的变体已被证明可以调节LNP物理性质、纳米结构和最终功效。两性离子磷脂通常被称为“辅助脂质”。LNPs在保护mRNA、促进细胞内传递、以及激活免疫反应方面发挥关键作用。

LNP转染实验步骤

下述转染步骤中为6孔板单孔参考条件。对于其他培养形式，请参考表1。

1、mRNA 预混液制备

将2.5ug mRNA（浓度为1ug/uL）与60uL Buffer混合。

2、mRNA-easyLNP复合物

将62.5uL mRNA预混液与62.5uL easyLNP纳米混悬液混合，涡旋2-3s，混匀。

3、加入细胞

将125uL mRNA-easyLNP复合物加入细胞，轻轻晃动使均匀分散。

4、分析时间

培养24-48h后分析。

表1 根据每孔使用的细胞培养容器的mRNA转染指南

mRNA细胞转染步骤	试剂	96孔板	24孔板	6孔板
（1）40ng/μL mRNA预混液制备	Buffer(以mRNA原液浓度1μg/μL为例)	2.4μL	12μL	60μL
（1）40ng/μL mRNA预混液制备	mRNA	0.1μg	0.5μg	2.5μg
（2）mRNA-easyLNP复合物制备	easyLNP纳米混悬液	2.5μL	12.5μL	62.5μL
（2）mRNA-easyLNP复合物制备	mRNA预混液	2.5μL	12.5μL	62.5μL
（3）加入细胞	mRNA-easyLNP复合物	5μL	25μL	125μL

实验示意图：

产品推荐：

转染方式	货号	品名	规格
细胞	abs60339	mRNA转染试剂	1mL
	abs60620	easyLNP? mRNA免疫细胞转染试剂盒	1.5mL/3mL/5mL
	abs60621	easyLNP? Plus通用型RNA细胞转染试剂盒	1.5mL/3mL/5mL
	abs60322	Lipofect5000质粒转染试剂	0.5mL/1.0mL
	abs60255	质粒DNA转染试剂盒(贴壁细胞)	0.5mL/1.0mL/1.5mL
	abs60256	PM原代细胞质粒DNA转染试剂盒	0.1mL/0.5mL/1.0mL/1.5mL
	abs60327	SP悬浮细胞质粒DNA转染试剂盒	0.1mL/0.5mL/1.0mL/1.5mL
	abs60369	RF 293细胞DNA转染试剂盒	0.5mL/1.5mL
	abs60259	核酸转染试剂盒	0.5mL/1.0mL/1.5mL
	abs60324	PM原代细胞核酸转染试剂盒	0.5mL/1.0mL/1.5mL
	abs60325	SP悬浮细胞核酸转染试剂盒	0.5mL/1.0mL/1.5mL
	abs60252	小核酸转染试剂	0.5mL/1.0mL/1.5mL
	abs60253	PM原代细胞小核酸转染试剂	0.1mL/0.5mL/1.0mL/1.5mL
	abs60254	SP悬浮细胞小核酸转染试剂	0.1mL/0.5mL/1.0mL/1.5mL
	abs60317	核酸共转染试剂	0.5mL/1.0mL/1.5mL
	abs7993	50nm磁转染试剂	100uL
转染增强剂	abs42025397	聚凝胺溶液	1mL
	abs42085824	海美溴铵	5g
	abs42085198	鱼精蛋白硫酸盐	5g/25g
动物体内	abs60622	easyLNP? mRNA体内转染试剂盒(全身作用)	0.3mL/0.5mL/1mL
动物体内	abs60623	easyLNP? mRNA体内转染试剂盒(局部作用)	0.3mL/0.5mL/1mL
核酸转染(动物体内)	abs60258	Elite Fect-I小核酸活体组织转染试剂(小鼠转染)	3只/6只

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