新一代CRBN Binding Kit能否迎来TPD的另一个春天

2025-09-15

过去十年，靶向蛋白降解（TPD）从实验室宠儿跃升为千亿级产业，Cereblon（CRBN）作为最常用的 E3 酶之一，其配体亲和力数据直接决定 PROTAC 分子的活性窗口。然而，一个被忽视的技术细节——示踪剂（tracer）的标记方式——正悄悄拉大我们与真实客观数值的距离。

进口R品牌的高通量CRBN Binding Kit 用“沙利度胺-荧光蛋白”作为示踪剂，在行业内率先建立了高通量筛选范式，这一方案如今被我们重新拆解、验证、升级。它不是简单的“国产替代”，而是对实验失真问题的系统性修复，让IC50首次更加接近客观真值。

失真源头：当 105 kDa 的 APC 蛋白骑在 0.25 kDa 的沙利度胺头上

XL665作为第一代acceptor，是改良过的别藻蓝蛋白（APC），将 APC的亚基偶联，增加了稳定性，位于红外光区，激发波长 620nm，发射波长665nm，进一步降低了生物溶液对实验的影响（生物学成分很少在红外光区有自发荧光），XL665作为acceptor在CRBN Binding中使用，分子量约为105 kDa，但是与沙利度胺偶联后，对体系有以下影响：

空间位阻：

? APC/XL665 的直径≈6nm，相当于沙利度胺长度的 10 倍，在 CRBN 浅口袋入口形成“荧光墙”；
? 大分子荧光标记会在 CRBN 浅口袋入口处产生空间位阻，导致表观 K_d 被系统性高估 1.5–4 倍。

扩散速率：

? 蛋白示踪剂整体分子量高，扩散系数 D 下降；
? 小分子候选物（< 0.5 kDa）扩散系数远高于kit中标记后的沙利度胺，竞争环境失衡。

结果失真：

? 以上这些影响因素导致IC50数值与结果存在偏差，影响候选物的选择

技术破局：把小分子还给小分子

用分子量小于1kDa的小分子荧光团直接标记沙利度胺，从物理层面消除两大失真因子，竞争动力学回到“小分子对小分子”的公平赛道，让每一次 IC50都经得起临床拷问。

数据说话

（1）标准曲线

由图表可知，由于Thalidomide标准品与Thalidomide-Ac竞争与CRBN/DDB1的结合，使信号值降低。

（2）结合活性和抑制剂验证*

Thalidomide-Ac与CRBN/DDB1结合验证，由结果可知，蛋白浓度不变时，检测信号随着Thalidomide-Ac浓度的升高而增加。Lenalidomide和Pomalidomide以及PROTAC BET Degrader-1可以竞争Thalidomide-Ac与CRBN/DDB1的结合。

*数据仅做示例参考

不止于 CRBN，更有 PROTAC的“一站式解决方案”

? 基于TR-FRET的三元复合物筛选

标曲	货号	商品名
	abs560016	Human BRD4/CRBN PROTAC Binding Kit
	abs560042	Human BCL-XL/CRBN PROTAC Binding Kit
	abs560044	Human BCL-XL/VHL PROTAC Binding Kit
	abs560012	Human DDB1-CRBN&GSPT1 Binding Kit
	abs560054	HumanVAV1/CRBN PROTAC Binding Kit

? PROTAC药靶蛋白

靶点缩写	主要针对疾病	PROTAC	Absin	UA
AR（雄激素受体）	前列腺癌	ARV-110		UA080416
BCL6	淋巴瘤			UA080266
Bcl-X(L)	淋巴瘤		abs06285
B-rafV600E	恶性黑色素瘤			UA080261
BRD4	多种癌症			UA080277
BRD9	多种癌症
BTK	慢性淋巴细胞白血病	NX-2127		UA080041
EGFR	非小细胞肺癌		abs05321
ER（雌激素受体）	乳腺癌	ARV-471	abs04404
IRAK4	自身免疫性疾病			UA080294
KRASG12D	实体瘤	ASP-3082		UA010733
MDM2	多种癌症	MD-224	abs06561
NTRK	实体瘤		abs05487
STAT3	复发或难治性淋巴瘤	KT-333		UA080435

? PROTAC分子——阳性对照

货号	商品名	靶点
abs820796	(S,R,S)-AHPC hydrochloride	E3 ligase VHL
abs828204	ACBI1	SMARCA4:11 nM, SMARCA2:6 nM, PBRM1:32 nM
abs828800	AR Antagonist 1	Androgen Receptor:
abs825142	ARD-2128	VCaP:4 nM (IC50), LNCaP:5 μM (IC50)
abs821542	BETd-260	BRD4PROTAC
abs828404	BSJ-4-116	CDK12:6 nM
abs819411	dBET1	BRD4
abs826439	Dbet57	BRD4 (BD1):500 nM (DC50)
abs825346	dBRD9	ligand that recruits the cereblon E3 ubiquitin ligase:104 nM
abs821654	dTRIM24	TRIM24.
abs824454	LC-2	KRAS(G12C):0.25-0.76 μM (DC50)
abs819853	MD-224	MDM2
abs826178	MS4078	EML4-ALK:59 nM(DC50; NPM-ALK:11 nM(DC50);ALK:33 nM
abs828684	MT-802	BTK:1 nM(DC50)
abs821197	MZ 1	BRD4
abs821447	MZP-54	Brd4BD2
abs820470	PROTAC ERRα Ligand 1	IC50s of 0.04 and 2.8 μM for ERRα and ERRγ
abs828072	PROTAC ERRα Ligand 2	ERRα:5.67 nM
abs821731	TD-106	CRBN
abs823151	THAL-SNS-032	CDK9
abs826853	UNC6852	EED:247 nM
abs818009	VH-298	VHL:HIF-α
abs826121	YX-2-107	CDK6:4.4 nM
abs827426	ZEN-3219	BRD4BD1:0.48 μM, BRD4 BD2:0.16 μM

? PROTAC靶点相关抗体

靶点	货号	品名
Ubiquitin	abs155938	Mouse anti-Ubiquitin Monoclonal Antibody
AR	abs145396	Rabbit anti-Androgen Receptor mAb (JRMR-244)
BCL6	abs145233	Rabbit anti-BCL6 Monoclonal Antibody(JRMR-56)
Bcl-X(L)	abs159218	Rabbit anti-Bcl-XL Monoclonal Antibody(2D3)
B-rafV600E	abs173916	Rabbit anti-BRAF Recombinant mAb (S-1328-60)
BRD4	abs133244	Rabbit anti-Brd4 Polyclonal Antibody
BRD9	abs117685	Rabbit anti-BRD9 Polyclonal Antibody
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PROTAC Assay定制标记

服务类目	原料用量	交付周期（天）
供体/受体荧光素标记服务（小量）	100ug	7+
	蛋白\抗体单独标记供体荧光素或受体荧光素，100ug纯化的蛋白或抗体，可做5000-10000Tests
供体/受体荧光素标记服务（中量）	500ug-1mg	7+
	蛋白\抗体单独标记供体荧光素或受体荧光素，不超过1mg纯化的蛋白或抗体，可做25000-50000Tests
标记+最优配对测试	100ug each	10+
	将一对抗体或蛋白，分别正反向标记供体荧光素和受体荧光素（共4个标记），并进行最优配对测试
均相Assay开发	-	14+
	外采蛋白原材料，进行直接或间接标记开发TR-FRET实验，服务包含标记和实验开发（会选择不同的原材料和标记进行测试，成功支付50000元，不成功付25000元实验材料费）

TPD 的黄金时代已经到来，但黄金也需要准确的刻度。我们相信，真实的数据是创新最大的加速器。当示踪剂的分子量回到小于1kDa，我们不仅修复了一个实验参数，更为整个行业节省了大量时间、资本与试错的生命。

好消息！Absin文献奖励重磅升级！

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爆款产品：十大试剂盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化检测、残留检测、多因子检测)；细胞培养(类器官试剂盒+基质胶，胎牛血清+培养添加剂+细胞因子)、分化试剂盒；分子(mRNA合成服务+提取试剂盒)；化合物大包装；辅助试剂、耗材/仪器、定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)...

特色产品：鸡胚提取物CEE、B27、N2、霍乱毒素B亚单位CTB、牛脑垂体提取物BPE、百日咳毒素PTX、重组人胰岛素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...

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