mRNA疫苗研究明星爆品——牛痘病毒加帽酶

2021-12-10

真核生物中mRNA经转录后修饰在5′端形成一个特殊结构，即帽子结构，该结构对 mRNA的稳定、转运与翻译过程均有较重要作用。牛痘病毒加帽酶是催化形成帽子结构的有效酶，其由D1和D12两个亚基组成，兼具RNA三磷酸酯酶活性、鸟苷酰基转移酶活性和鸟嘌呤甲基转移酶活性，可将7-甲基鸟嘌呤帽结构(m7Gppp)连接到RNA的5′末端(m7Gppp5′N)。使用酶促反应为RNA加帽是一种简单有效的方法，能显著提高体外转录的RNA的稳定性和翻译能力。的掺入，合成与T7启动子下游的模板DNA互补的RNA。

产品特点：
本产品在合适浓度的加帽缓冲液（Capping buffer），鸟苷三磷酸（GTP），S-腺苷甲硫氨酸（SAM）等存在条件下，能够在一个小时之内对RNA进行加帽，效率可达到100%，并且保证加帽方向正确。

质量保证：
1、SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带，毛细管电泳检测纯度在95%以上；
2、酶动力学实时荧光法显示无DNA酶及RNA酶污染；
3、光度测定法显示内毒素含量≤10 EU/mg。

产品用途：
1、可应用于体内/体外翻译前mRNA的加帽反应；
2、可应用于mRNA的5’末端标记反应。

纯度验证

RNA酶残留定量检测

	RFU值	RFU平均值	CV%	Ratio
VCE A	28469 28580	28524.5	0.2752	1.76
VCE B	79995 78605	79300	1.2394	4.88
VCE absin	17845 17906	17875.5	0.2413	1.1

应用实例
【加帽反应】
适用于10μgRNA (>I00nt)的加用反应，反应体系20μL,且可根据实际需要放大。
1.取10μgRNA,用 RNase free water将适量 RNA稀释至15μL；
2.将RNA置于65℃加热5min,结束后冰上放置5 min；
3.按照表格依次加入各组分；
4.37℃反应30 min.
5.RNA加帽完成，可进行后续实验.

组分	体积
Denatured RNA	15μL
10x Capping Reaction Buffer	2μL
GTP(l0 mM)	1μL
SAM (2 mM)	1μL
Vaccinia Capping Enzyme (10 U/μL)	1μL
Total volume	20μL

应用实例
【5′末端标记反应】
本步骤适用于5′末端带有三磷酸的RNA标记，且可根据实验需要放大。其标记效率受反应体系中RNA与 GTP摩尔浓度比以及RNA样本中GTP含量影响。
1.用RNase Free Water将适量RNA稀释至 14μL；
2.将RNA置于65℃加热5 min,结束后冰上放置5 min；
3.按照表格依次加入各组分：
4.37℃孵育30 min；
5.RNA5′端标记完成，可进行后续实验。
*注：GTPMix为GTP和少量标记物，GTP储液应稀释为反应体系中mRNA摩尔浓度的1-3倍。

组分	体积
Denatured RNA	14 μL
IOx Capping Reaction Buffer	2μL
GTP Mix	2μL
SAM (2 mM)	1μL
Vaccinia Capping Enzyme (10 U/μL)	1μL
Total volume	20μL

产品信息

货号	名称	规格
abs60152	牛痘病毒加帽酶	500U/2000U/10000U

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货号	名称	规格
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