CCK-8 试剂盒常见问题解答（二）

2022-09-09

1、做细胞活性检测时，每孔应该接种多少个细胞？

答：当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1,000个/孔(100 μL培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500个/孔(100 μL培养基)。

2、在实验中吸光度值太高，如果不能减少细胞数量，如何解决？

答：可以缩短加入CCK-8后的培养时间。例如：可以把加入CCK-8试剂后的培养时间由2小时缩短为1小时。

3、培养基的本底颜色如酚红会不会影响细胞活性的检测呢？

答：不会的，培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光值而消去，因此不会对检测造成影响。

4、只可以在450nm波长处测OD值吗？

答：可以在450nm波长处测OD值，但是若无此波长的滤光片，可选择吸光度在430-490 nm之间的滤光片，但是450 nm滤光片的检测灵敏度最高。

5、若是暂不检测OD值，该如何处理？

答：若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。

6、在实验中OD值太高，怎么解决？

答：可以缩短加入CCK-8后的培养时间。例如：可以把加入CCK-8试剂后的培养时间由2小时缩短为1小时。此外，可适当减少细胞的数量。

7、如果OD值太低，怎么解决？

答：可以采取2个办法：1、适当增加细胞数量 2、延长加入CCK-8试剂后的反应时间。

8、应该每次做标准曲线吗？

答：建议每次做。虽然细胞是一样的，但是细胞的状态不一定一样。对于状态不一样的细胞，建议每次做标准曲线。

9、有时在药物作用情况下，细胞已经死亡，但是脱氢酶的活性还在，是否能计算细胞数量？

答：能。由于CCK-8是通过和细胞内的脱氢酶进行反应间接反映活细胞数量。

10、悬浮细胞和贴壁细胞在数量上有何区别？

答：悬浮细胞由于显色比较困难，一般需要增加细胞数量和延长培养时间。贴壁细胞显色比较容易，若细胞数量过大，有时吸光度会超过酶标仪的读数。

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