【技术原理】 |
多重荧光免疫组化(mIHC),主要的技术原理来自TSA技术,TSA即酪酰胺信号放大(Tyramide signal amplification)是一类利用辣根过氧化酶(HRP)对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法。该技术可与高性能染料Alexa Fluor®、传统荧光染料和比色检测系统相兼容。 TSA主要原理是利用酪胺Tyramide的过氧化物酶反应(酪胺盐在HRP催化H2O2下形成共价键结合位点),产生大量的酶促产物,该产物能与周围的蛋白残基(包括色氨酸、组氨酸和酪氨酸残基)结合,这样在抗原-抗体结合部位就有大量的生物素沉积,与随后加入的Streptavidin—HRP/荧光基团结合,经几次这样的循环放大,可以结合大量的酶分子or荧光基团,结果使其检测信号得到几何级放大。 |
![]() TSA多重荧光免疫组化染色示意图 |
简单来说,用这种方法做多重荧光染色是利用二抗上带有的HRP(而不是直接偶联荧光素),来催化后续添加入体系的非活性荧光素。该荧光素在HRP和过氧化氢的作用下被活化,跟临近蛋白的酪氨酸残基共价偶联,使得蛋白样品与荧光素稳定结合。然后进行微波处理,前一轮非共价结合的抗体被洗掉,共价结合的荧光素还留存在样品上。再换个一抗来第二轮孵育,周而复始。等到所有抗体孵育结束,荧光素都结合好后,最后去检测结果。 |
【mIHC技术优势】 |
1. 由于染色是多轮次进行,每次体系中都只有单一抗体孵育,因此无需担心抗体交叉反应,以及一抗二抗种属匹配问题,大大减少了实验设计时不同种属抗体选择匹配的限制。 2. TSA技术可以用于检测用传统方法无法检出的低丰度靶标。基于酪酰胺的信号放大技术能够提供极强的敏感度、检测极微量的目的抗原。极大的降低抗体的用量,节约抗体,实测确实可以显著提升抗体的稀释比例。 3. 多重荧光免疫组化法,可同时进行六个指标七色成像,这种情况下发射光谱会重叠,我们可以借助多光谱成像系统来解决这个问题。这是传统间接荧光法染色和显色法多重免疫组化所做不到的。这种方法能真实反映关键蛋白的表达情况和相互之间的关系,从而极大地节约珍贵的样品。 |
【为什么选择Absin?】 |
· Absin是国内首批多色平台之一丰富的项目经验和指标验证经验; · 拥有优秀的软硬件设施,定量分析采用数字病理金标准分析平台HALO软件; · 资深多色团队共同服务客户,为您提供常见免疫微环境panel推荐、抗体推荐、项目探讨等售前售后咨询服务。 |
【爱必信多色服务】 |
我们可以提供的服务: |
最多六指标七色(含DAPI)的多重荧光免疫组化服务,样本种属涵盖人、小鼠、大鼠、猪等;组织类型以肿瘤样本居多,涵盖肺、胃、肝、肾、肠等各大器官,甲状腺、胰腺、唇腺、泪腺等各大腺体,另还有眼球、神经、大脑等特殊样本;切片类型涵盖石蜡切片、组织芯片(TMA)、冰冻切片等,并提供全片扫描和定量分析。 |
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个性化服务(先做预实验,实验有保障,结果更完美!) |
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标准化检测(高性价比,已优化过条件,只需提供样本,直接出实验结果!强烈推荐!) |
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种属 |
六色 FLASH panel |
应用 |
备注 |
人 |
panCK、CD3、CD19、CD68、CD56 |
常规肿瘤浸润淋巴细胞panel,可评估肿瘤微环境冷热,方便探究肿瘤抑制手段效果 |
可更换其他免疫细胞指标及肿瘤指标 |
小鼠 |
panCK、CD3、CD19、F4/80、NK1.1 |
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人 |
CD4、CD8、LAG3、TIM-3、PD-1 |
涵盖多热门免疫检查点 |
可替换其他染过的免疫检查点指标 |
小鼠 |
CD4、CD8、LAG3、TIM-3、PD-1 |
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种属 |
五色 FLASH panel |
应用 |
备注 |
人 |
CD3、CD4、CD8、FOXP3 |
T细胞分型panel |
FOXP3可替换为TH1指标T-bet或者TH2指标GATA-3 |
小鼠 |
CD3、CD4、CD8、FOXP3 |
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人 |
panCK、CD68、CD163、HLA-DR |
肿瘤相关巨噬细胞TAM及分型panel |
无 |
小鼠 |
panCK、F4/80、CD86、CD163 |
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人 |
panCK、CD8、PD-1、PD-L1 |
经典PD-1/PDL1可行性分析panel |
无 |
种属 |
四色 FLASH panel |
应用 |
备注 |
人 |
a-SMA、panCK、VEGF |
肿瘤相关成纤维及血管生成因子 |
可更换FAP、VIM、FGF等相关因子 |
小鼠 |
a-SMA、panCK、VEGF |
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人 |
CD8、ki-67、Granzyme B |
T细胞活化及增殖panel |
无 |
小鼠 |
CD8、ki-67、Granzyme B |
多重荧光免疫组化试剂盒(有仪器,自己做,操作简便,染料二抗一应俱全!) |
Multicolor-Kit |
染料组成 |
其他成分 |
备注 |
四色多重荧光免疫组化试剂盒 |
TSA520/TSA570/TSA650 |
信号放大反应液 鼠兔通用/抗兔二抗 封片剂 DAPI |
常规拥有DAPI,FITC,CY3,CY5等通道的荧光/共聚焦显微镜即可成像 |
五色多重荧光免疫组化试剂盒 |
TSA520/TSA570/TSA620/TSA700 |
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六色多重荧光免疫组化试剂盒 |
TSA520/TSA570/TSA620/TSA650/TSA700 |
需要仪器加装有窄带滤光块或仪器具有多光谱光谱拆分功能可成像 |
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七色多重荧光免疫组化试剂盒 |
TSA520/TSA540/TSA570/TSA620/TSA650/TSA700 |
【订购信息】
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我们可以提供的服务结果: | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
1. 全片200X(相当于物镜20X,目镜10X)原图,提供看图软件可在客户端打开。数据上传百度网盘。 2. 客户指定区域的单细胞分析结果: 单阳性细胞占有核细胞百分比,密度。 多阳性细胞占有核细胞百分比,密度。 组织面积和特定病理形态面积计算。 TMA提供每个芯点的以上定量结果,并提供热图。 |
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【应用案例】 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
1. 人 T细胞活化状态检测 CD3 CD69 HLA-DR | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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2. 类器官体外检测、肿瘤标志物检测 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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3. 同源小鼠肿瘤模型免疫细胞浸润检测 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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4. 甲状腺七色免疫微环境检测 CD4、FOXP3、CD20、CD56、CD3、panCK | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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5. 猪脑动脉染色 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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【应用代表文献(精选)】 |
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![]() 黑色素瘤组织,CD8,PD1,S100,Sox10,PD-1药物抗性及病人复发机制
Zaretsky, J. M., et al. (2016). "Mutations Associated with Acquired Re-sistance to PD-1 Blockade in Melanoma." N Engl J Med 375(9): 819-29. IF 59.558
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Merkel细胞癌组织,NSE,CD8,CD68,PD1,PD-L1综合分析免疫治疗前后肿瘤组织微环境状态变化
Nghiem, P. T., et al. (2016). "PD-1 Blockade with Pembrolizumab in Ad-vanced Merkel-Cell Carcinoma." N Engl J Med 374(26): 2542-52. IF 59.558
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胰腺癌.Snail,Twist, Snail 对EMT(上皮间质转化)的影响
Nature. 2015 November 26; 527(7579): 525–530. doi:10.1038/nature16064.
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肝癌组织,CD3,CD68,肝癌免疫景观分析决定PD-L1异质性与治疗敏感性
中山大学郑利民教授 The Journal of Clinical Investigation,J Clin Invest. 2019.
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【客户文献索引】 |
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Chang M, Lin H, Fu H, Wang J, Yang Y, Wan Z, Han G. CREB activation affects mesenchymal stem cell migration and differentiation in periodontal tissues due to orthodontic force. Int J Biochem Cell Biol. 2020 Dec;129:105862. doi: 10.1016/j.biocel.2020.105862. Epub 2020 Oct 10. PMID: 33045372. 更多精彩文献,敬请期待...... |
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