锁相胶（PLG）—水/有机相分离神器

一、产品简介

锁相胶，（Phase Lock Gel，PLG）可消除酚提取过程中的相间蛋白质污染，PLG在离心过程中迁移，在水/有机萃取物的各相之间形成紧密的密封。有机相和中间相材料被有效地捕获在隔离层中，PLG 就像一把锁，紧紧锁住了可能污染核酸的杂质，也就最大限度地释放了样品中的核酸。

锁相胶（PLG）使用流程

本品适合所有公司的 TriiZol（包括 Invitrogen），可纯化RNA和DNA。此外，PLG不仅限于核酸提取，还可用于任何需要水相-有机相分离的实验，尤其在去除蛋白质、提高产物纯度方面表现优异，适用于分子生物学、生物化学、蛋白质组学等多个领域。

产品特色与优势：

1、消除核酸溶液的相间污染。

2、核酸产量提高 30％。

3、凝胶屏障可轻松倾析样品。

4、减少与有害有机溶剂的接触。

5、不受任何标准的核酸限制性酶和修饰酶的影响。

二、使用方法

以爱必信的TriiZol（abs60154）为例
 

1、细胞裂解

组织样本

 TriiZol用量：每 50-100 mg 组织加 1 mL TriiZol，样品体积不应超过 TriiZol 体积的 10％。

（1）将动物或植物组织切成小块，在液氮中磨碎或用匀浆器匀浆处理。

（2）将研磨好的组织粉末快速转入装有 1 mL TriiZol 的2 mL离心管中，在涡旋振荡器上迅速振荡混匀，置于冰上，待所有的样品研磨完。

（3）裂解产物应呈澄清的透明粘稠液体。对于富含蛋白、脂肪或多糖物质的组织样品如肌肉、脂肪组织和植物结节部位等，匀浆后仍会存留有不溶物质，可于 4℃ 12,000 x g 离心 10 min，然后吸取上清至一新的离心管中。

细胞样本

（1）贴壁细胞：吸尽培养液，每 10 cm²培养面积（6 孔板单孔或 35 mm 平皿）加入 1 mL TriiZol，用加样器吹打数次，以确保细胞完全裂解，然后转移至离心管中。 注：TriiZol 的使用量应由培养皿表面 积决定，而非由细胞数目决定。TriiZol 量不足可能导致提取的 RNA 中有 DNA 污 染 。

（2）悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，每 5-10×10⁶动植物或酵母细胞，或每 1×10⁷细菌细胞加入 1mL TriiZol， 用加样器吹打，使其完全裂解，然后转移至离心管中。 注：添加 TriiZol 前切勿洗涤细胞 ，以免 RNA 降解。必要时可以用匀浆器来裂解某些细菌或者酵母细胞 。

2、液相分离

（1）裂解产物于室温放置 5 min，使核酸-蛋白复合物完全分离。（注：此时样品可在-80℃长期保存。

（2）取1支2mL锁橡胶（使用前12000x g ,离心30s ），将裂解产物和0.2 mL 氯仿（每 1 ml TriiZol 加入 0.2 ml 氯仿）加入锁橡胶中，盖紧管盖，手动振荡 15 s（禁止涡旋），室温放置 2-3 min。

（3）4℃ 12,000 x g 离心 15 min，锁橡胶会在水相和有机相之间形成一层致密的固体，将中间层的蛋白杂质和下层有机相完全锁在固体之下。

• 吸取含总 RNA 的上层水相至一新的离心管中，全部水相样品可轻松吸出，完全不用担心混入杂质，也不用担心酚氯仿会不小心流出来。（注：对于大体积的样品抽提，还可以直接将全部水相倒出而有机相依然被牢牢“锁定”在管底不会流出。）

3、RNA 回收

（1）按照每 1 mL TriiZol 的最初使用量加入 0.5 mL 异丙醇，颠倒数次混匀，室温放置 10 min。

（2） 4℃ 12,000 x g 离心 10 min，弃除上清，可见胶状的 RNA 沉淀。

（3）按照每 1 mL TriiZol 的最初使用量加入 1 mL 75%乙醇，颠倒数次混匀，洗涤沉淀。

（4）4℃ 12,000 x g 离心 5 min，弃除上清。

（5）室温倒置 5-10 min 晾干或真空抽干（不要使用真空干燥离心机，以免 RNA 过干，难以溶解）。

（6）加入适量（如 25uL） DEPC-ddH2O 或 TE 缓冲液，用加样器吹打数次溶解 RNA。

（7）通过 RNA 电泳以及紫外分光光度计检测，确定 RNA 的浓度、纯度和完整性。

（8）所得的 RNA 应立即使用或适量分装后-80℃保存，避免反复冻融。

注意事项

该试剂在室温下保存时稳定，请勿冻结。

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