突破 CNV 治疗瓶颈！动态共价脂质纳米粒介导 CRISPR-Cas9 编辑助力基因治疗新突破

文献标题：Dynamically covalent lipid nanoparticles mediate CRISPR-Cas9 genome editing against choroidal neovascularization in mice

发表期刊：Science Advances（IF 12.5） | DOI：https://www.science.org/doi/10.1126/sciadv.adj0006

使用 Absin 产品：Cas9 mRNA

一、研究思路：精准靶向，破解传统疗法困局

现有 CNV 治疗面临两大核心难题：一是抗 VEGF 药物需频繁注射，易引发眼内高压、出血等并发症；二是病毒载体介导的基因编辑存在免疫原性和脱靶风险，非病毒载体则面临转染效率低、胞内释放难等问题。

针对这些痛点，研究团队提出创新解决方案：

• 1. 构建动态共价脂质体库：通过 “一锅法” 合成含亚胺硼酸酯键的脂质体，兼具 pH 和 H?O?响应性，实现病变部位精准降解；
• 2. 优化递送系统：筛选出高效低毒的 LNP-A?B?C?，共递送 Cas9 mRNA 和 VEGFA 靶向 sgRNA，在病变 RPE 细胞内触发释放；
• 3. 简化给药方式：采用玻璃体腔注射，通过 Müller 细胞转胞吞作用穿透视网膜屏障，避免侵入性更强的视网膜下注射。

二、核心研究成果：长效编辑，疗效超越临床药物

（一）脂质体库筛选与性能验证

研究团队合成了系列含亚胺硼酸酯键的脂质体，经高通量筛选发现 LNP-A?B?C?表现最优：

• 转染效率显著高于商用转染试剂 Lpf2k 和 FDA 批准的 LNP-ALC-0315（Fig.2D）；
• 细胞毒性低，在 mRNA 浓度达 5μg/ml 时细胞存活率仍超 80%（fig.S20）；
• 可在 CNV 病变部位高浓度 H?O?触发下快速降解，释放 mRNA（Fig.3）。

图3：酸和H?O?触发的脂质体降解、LNP解离及mRNA释放机制图（原文Fig.3）

（二）体内外基因编辑与治疗效果

1. 体外实验：在 H?O?预处理的 RPE 细胞中，LNP-A?B?C?介导的 VEGFA 基因编辑效率达 70.4%，显著降低 VEGFA mRNA 和蛋白分泌（Fig.5E、F）；

图4：体外VEGFA基因编辑效率及表达水平检测（原文Fig.5）

2. 体内穿透：玻璃体腔注射后，纳米粒可通过 Müller 细胞转胞吞作用到达 RPE 层，48 小时后

仍能检测到 mRNA 信号（Fig.6A、B）；

图5：纳米粒体内视网膜穿透及分布（原文Fig.6）

3. 治疗效果：在激光诱导 CNV 小鼠模型中，单次注射后 VEGFA 基因敲除效率达 57%，CNV 面积减少 76%，疗效与临床药物阿柏西普相当（Fig.8）；

图6：CNV小鼠模型体内治疗效果评估（原文Fig.8）

4. 长效优势：二次激光损伤后，该基因编辑方案仍能有效抑制 CNV，而阿柏西普因代谢快未表现出治疗效果（Fig.9）。

图7：二次激光损伤后的长效治疗效果（原文Fig.9）

（三）生物安全性优异

LNP-A?B?C?未引发明显炎症反应，视网膜组织无病理异常，主要脏器及血液学指标均无毒性表现（fig.S49-S52），解决了传统载体免疫原性和细胞毒性问题。

图8：小鼠眼内炎症因子水平检测（原文Fig.S49）

图9：视网膜组织HE染色（原文Fig.S50）

图10：主要脏器HE染色（原文Fig.S51）

图11：血液生化和血液学指标检测（原文Fig.S52）

三、Absin 产品赋能：Cas9 mRNA 成基因编辑核心工具

（一）关键产品：Cas9 mRNA（货号：abs60141）

研究中用于构建 CRISPR-Cas9 编辑系统的核心组件 Cas9 mRNA，由 Absin 提供。该产品具有高纯度、高活性、无免疫原性等优势，可高效翻译出 Cas9 蛋白，与 sgVEGFA 形成核糖核蛋白复合物（RNP），精准切割 VEGFA 基因靶点。

（二）产品核心作用

1. 作为基因编辑的 “剪刀” 模板：Absin 的 Cas9 mRNA 进入 RPE 细胞后，快速翻译产生 Cas9 蛋白，与 sgRNA 协同作用，实现 VEGFA 基因的特异性敲除（Fig.1C）；

图12：CRISPR-Cas9基因编辑机制示意图（原文Fig.1）

2. 保障编辑效率与安全性：相较于 Cas9 蛋白，mRNA 形式的 Cas9 在细胞内瞬时表达，避免长期存在导致的脱靶风险，且 Absin 产品的高稳定性确保了体内外实验中基因编辑的高效性（Fig.5E、7B）；

图13：体外VEGFA基因indel突变分析（原文Fig.5E）

图14：体内VEGFA基因indel突变分析（原文Fig.7B）

3. 适配递送系统：与 LNP-A?B?C?载体完美兼容，在 H?O?响应下释放后仍保持高活性，最终实现 VEGFA 基因表达下调和 CNV 抑制（Fig.7D、E）。

图15：体内VEGFA mRNA和蛋白水平检测（原文Fig.7D、E）

四、总结与展望

该研究通过创新的动态共价脂质体递送系统，结合 CRISPR-Cas9 基因编辑技术，成功实现了 CNV 的长效治疗，为 wAMD 等疾病提供了全新治疗策略。Absin 的 Cas9 mRNA 作为核心工具，凭借优异的活性和稳定性，在体内外基因编辑实验中发挥了关键作用，充分验证了其在基因治疗研究中的可靠性。

未来，Absin 将持续深耕生物试剂领域，为基因编辑、核酸递送等前沿研究提供更优质的产品支持，助力更多疾病治疗方案的突破与转化。

五、相关产品信息

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