革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴定染色法，媒染剂碘液进入菌体后与结晶紫结合，革兰氏阳性菌对碘与结晶紫摄取量多且牢固，不易被酒精脱色。革兰氏阴性菌对碘与结晶紫摄取量少，不牢固，易被酒精脱色。为观察方便，脱色后再用一种红色染料，如碱性番红进行复染。阳性菌仍为紫色，阴性菌则被染为红色。 

组分：

别名: 革兰氏染色试剂盒；GRAM Micro-OrganismsStaining Solution

使用方法: 一、准备： 1、使用无菌接种环，挑取一薄层样品置于载玻片上并涂片； 接种环通过酒精灯火焰灼伤而达到无菌，使用前可以冷却 30 秒；如果检测的组织样品可能被细菌污染，或者在培养基中有细菌生长，可直接用接种环 挑取样品并置于载玻片上。如果检测培养板上生长的细菌克隆，可现在载玻片上滴加一滴无 菌水，然后挑取一个克隆，并将其置于水中。 2、使涂片自然干燥，热固定，在酒精灯的火焰上略过 2~3 次； 注意：不要将载玻片持续置于火焰上，以免样品过热。 二、染色： 1、将热固定后的载玻片置于装有草酸铵结晶紫染液的染缸中，使载玻片在染缸中站立 30 秒； 2、使用自来水轻轻的洗载玻片 5 秒，抖掉多余的水； 3、将载玻片置于装有革兰氏碘液的染缸中 1 分钟，按照第四步的方法水洗，并抖掉多余的水； 三、脱色和复染： 1、略微倾斜载玻片，将酸酒精滴加在载片上端，使其下滑通过样品区，直至紫色出现为止。 重要的是，脱色既不能过度也不能不足。如果脱色过度，可将革兰氏阳性菌误判为阴性菌； 如果脱色不足，可将革兰氏阴性菌误判为阳性菌。 2、按照第四步的方式水洗 5 秒，抖掉多余的水分； 3、使用番红复染液染色 30 秒； 4、按照第四步的方式水洗 5 秒，抖掉多余的水分。允许其自然干燥，或者用吸水纸小心的将 水分吸干。 四、镜检： 1、在油镜(900×~1000×)下观察细菌以区分革兰氏阳性菌和阴性菌。 不要使用盖玻片，在载玻片中间加一滴油观察细菌。如果需要，载玻片可保存于载片盒中数月再观察。 革兰氏阳性菌呈现紫色而革兰氏阴性菌呈现粉红色。

注意事项: 1、革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精的脱色程度，如脱色过度，阳性菌可被误染为阴性菌； 而脱色不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解，都常呈阴性反应。
2、标本涂片不能太厚。
3、玻片通过火焰温度不能过高。
4、若涂片较厚，延长脱色时间，直至不再出现紫色为止。
5、碘液变透明，则不能使用。 
6、水洗时动作用轻柔，沿载玻片对角线方向用洗瓶冲洗，以免把菌体冲掉。