描述：

RIPA 裂解液（RIPA Lysis Buffer），本意为 Radio Immunoprecipitation Assay，是一种传统的细胞组织快速裂解液，对组织和细胞都有较好的裂解作用。RIPA 的配方有很多种，根据其裂解强度的不同，大致可分为强、 中、弱三类，应用上会有一些差异。

本品为裂解性较强的 1×RIPA 裂解液，主要成分为 50mM Tris-HCl (pH 7.4)，150mM NaCl，1% Triton X-100,1% 脱氧胆酸钠，0.1% SDS，以及正钒酸钠，氟化钠，EDTA 和抑肽酶等多种抑制剂，可广谱且有效抑制蛋白 降解，经本品裂解所得的蛋白样品，适用于蛋白免疫印迹（Western Blot），免疫沉淀（IP），和免疫共沉淀（Co-IP）等实验。经本品裂解收集的蛋白样品，可使用增强型 BCA 蛋白浓度测定试剂盒 测定总蛋白浓度。由于本品含有较高浓度的去垢剂，不适合用 Bradford 法来测定总蛋白浓度。

产品组分：

使用方法：

一、培养的细胞样品
1、充分融解RIPA裂解液，之后混匀。取适当量的裂解液，使用前数分钟内加入PMSF（分子量：174.2 g/mol），使其最终浓度为1mM。
2、贴壁细胞：吸除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍（如果血清中的蛋白没有干扰，可忽略此步）。按照六孔板的每孔细胞加入150-250ul裂解液的比例加量。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
悬浮细胞：离心收集细胞，用手指弹散细胞。按照六孔板的每孔细胞加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。
3、充分裂解后，10,000-14,000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、WB和免疫沉淀等实验。
【裂解液用量说明】：通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够，如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μl或250μl。

二、组织样本
1、将组织剪切成细小的碎片，使用匀浆仪进行匀浆。
2、充分融解RIPA裂解液，之后混匀。取适当量的裂解液，使用前数分钟内加入PMSF（分子量：174.2 g/mol），使其最终浓度为1mM。
3、按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加量。【注意：如果裂解不充分可以适当添加用量，如果需要高浓度的蛋白样品，可适当降低用量。】
4、充分裂解后，10,000-14,000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、WB和免疫沉淀等实验。
5、如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过高强度的漩涡混匀器使样品裂解充分，之后使用相同步骤操作。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解的足够充分。
【注意】：RIPA裂解液的裂解产物经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散这些透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。像检测一些常见的转录因子，例如NF-kB、p53，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。

注意事项：

1、去除贴壁细胞的培养液时，如果血清中的蛋白没有干扰，可以不用清洗。
2、如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。
3、如果细胞量较多，必须分装成 50～100 万细胞/离心管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。
4、如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈 Vortex 使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
5、溶解 RIPA 裂解液时，应尽量缩短溶解时间，避免裂解液中的有效成分失效。
6、裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组 DNA 等的复合物。在不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如 NF-KB、p53 等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。
7、细胞裂解的操作步骤，应置于冰上或 4℃进行。
8、为了您的安全和健康，请穿戴好个人防护装备和服装进行操作。

储存/保存方法：

-20℃保存，有效期12个月

部分引用文献展示：

• MALAT1 promotes platelet activity and thrombus formation through PI3k/Akt/GSK-3β signalling pathway

  Yeying Sun,Tao Wang,Yan Lv,Jiahua Li,Xiaoli Jiang,Jing Jiang,Daolai Zhang,Weihua Bian,Chunxiang Zhang

  Stroke and Vascular Neurology. 2022 Oct 14 .

  影响因子： 9.893

• lnc001776 Affects CPB2 Toxin-Induced Excessive Injury of Porcine Intestinal Epithelial Cells via Activating JNK/NF-kB Pathway through ssc-let-7i-5p/IL-6 Axis

  Kaihui Xie, Zunqiang Yan, Qiaoli Yang, Xiaoyu Huang, Pengfei Wang, Xiaoli Gao, Jie Li, Shuangbao Gun

  Cells. 2023 Mar 29 .

  影响因子： 7.666

• The extract from Hyssopus cuspidatus Boriss. Prevents bronchial airway remodeling by inhibiting mouse bronchial wall thickening and hASMC proliferation and migration

  Xiaocui Cai, Yan Mao, Xiaoli Shen, Haifang Li, Jinhua He, Mingjun Zhang

  JOURNAL OF ETHNOPHARMACOLOGY. 2022 Dec 14 .

  影响因子： 5.195