公告提醒:爱必信所有产品和服务仅用于科学研究,不用于及其他用途提供产品和服务(也不为任何个人提供产品和服务)!

产品描述:

产品名称:PI细胞周期与凋亡试剂盒

别名: PI细胞周期与凋亡试剂盒

储存/保存方法: -20 ℃避光保存,有效期12个月。

描述:

        本产品基于碘化丙啶(Propidium, PI)染色方法分析细胞周期 和凋亡。碘化丙啶是一种双链DNA染料,其嵌入双链DNA中可以 产生荧光,荧光的强度和双链DNA的量成正比。

        在正常细胞周期中,G0和G1期有1套染色体,G2和M期细胞 有2套染色体,S期介于两者之间。经PI染色后,处在不同细胞周 期中的细胞的荧光强度不同。假定G0和G1期的细胞荧光强度为 1,那么G2和M期的细胞的荧光强度为2,S期的细胞介于1和2之 间。

        细胞凋亡时,由于细胞核皱缩和DNA片段化,染色时DNA片 段会从打孔的细胞膜处丢失,流式细胞仪检测时,荧光强度小于 1,即Sub-G1峰或者凋亡细胞峰。

        细胞凋亡也可以用流式细胞仪观察细胞光散射的变化来检 测。凋亡前期,染色质皱缩,细胞密度增加,前向角光散色显著 降低。凋亡后期,细胞产生凋亡小体,前向角光散射和侧向角光 散色都显著降低。

产品组分:

应用: 本产品用于培养的贴壁细胞或者悬浮细胞检测,也可用于组织细胞检测。

使用方法: 自备耗材和设备: 1 ml 移液器 100-200 μl 移液器 旋窝混匀仪 流式细胞仪 PBS 75%乙醇 适用实验与操作过程: 1、细胞准备 贴壁细胞:弃细胞培养液,胰酶消化,制备单细胞悬液, 1000 g离心5分钟,弃上清。沉淀用1 ml预冷的PBS重悬。再次 1000 g离心5分钟,弃上清。 悬浮细胞:收集细胞悬液,1000 g离心5分钟,弃上清。沉淀 用1 ml预冷的PBS重悬。再次1000 g离心5分钟,弃上清。 组织细胞:将组织块用剪刀剪成尽量小的小块后,用0.25%的 胰酶消化0.5-1个小时。经过200-400目筛网过滤得到单细胞悬液。 1000 g离心5分钟,弃上清,沉淀用1 ml预冷的PBS重悬。再次 1000 g离心5分钟,弃上清。 注意,最后一次离心,弃上清后留50 μl上清,涡旋混匀。 2、细胞固定 细胞沉淀用1 ml -20 ℃预冷的75%乙醇轻轻混匀,4℃固定2小 时以上或者过夜。然后,1000 g离心5分钟,轻轻弃上清,沉淀用1 ml预冷的PBS重悬,1000 g离心5分钟,弃上清。 3、染色 PI染色工作液配置: 0.5 ml染色缓冲液(C液)中加入10 μl PI 染液(A液)和10 μl RNase A(B液),混匀待用。每个细胞样品 加入0.5 ml配置好的PI染色工作液,轻轻混匀重悬细胞。37℃,避 光孵育30分钟,直接上流式细胞仪检测(5小时内完成为佳)。激 发波长为488 nm,检测红色荧光。 注意:每个检测细胞数不超过1×10⁶个。

注意事项: 1、PI具有毒性,操作时应注意防护,、避免吸入、并戴一次性手套。
2、PI存在淬灭现象,保存和使用过程中注意避光。

产品信息订购:

产品更多信息请进入爱必信网站咨询