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产品描述:

产品名称:Caspase 6 活性检测试剂盒

别名: Mch-2;caspase-6;caspase 6

描述:

Caspase 6活性检测试剂盒是采用分光光度法检测细胞或组织裂解液中caspase 6酶活性或纯化的caspase 6酶活性的试剂盒。
Caspase是一个在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 6的前体被granzyme B剪切后可以形成活化的caspase 6二聚体,而活化的caspase 6被发现可以诱导细胞凋亡。Caspase 6可以剪切PARP和keratin-18,也可以剪切细胞核核被膜上的关键组成蛋白Lamin A。Caspase家族中仅caspase 6可以剪切Lamin A。Caspase 6对于Lamin A的识别位点是VEID。本试剂盒利用了caspase 6对于VEID识别的特异性,设计了相应的caspase 6特异的显色底物Ac-VEID-pNA。

使用方法: 测定pNA标准曲线: 1. 用反应缓冲液稀释10mM pNA标准品为200, 100, 50, 25, 12.5, 6.25, 3.125μM。设置不加pNA的零管。 2. 每一浓度取100 μl加入96孔板或100μl比色杯,测定405nm吸光度OD值。 3. 每一浓度标准管OD405值为x轴,对应的pNA浓度为y轴,用Excel制作pNA浓度对OD405值的标准曲线。 Caspase 6酶活性的检测: 1.取出适量的Ac-VEID-pNA(2mM),置于冰浴上备用。 2.按照100ul反应体系: 空白对照组:检测缓冲液40μl、待测样品0μl、裂解液50μl、Ac-VEID-pNA (2mM)10μl; 样品组:检测缓冲液40μl、待测样品50μl、裂解液0μl、Ac-VEID-pNA(2mM)10μl 3.加入Ac-VEID-pNA(2mM)后混匀,注意避免在混匀时产生气泡。37oC孵育60-120分钟。发现颜色变化比较明显时即可测定A405。如果颜色变化不明显,可以适当延长孵育时间,甚至可以孵育过夜。 4.样品的A405扣除空白对照的A405,即为样品中caspase 6催化产生的pNA产生的吸光度。通过上述步骤中获得的标准曲线对比就可以计算出样品中催化产生了多少量的pNA。

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