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产品描述:

产品名称:细胞核/浆蛋白抽提试剂盒

描述: 细胞核/浆蛋白抽提试剂盒(Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit)提供了一种比较简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提细胞核蛋白、细胞浆蛋白的方法。约 60 分钟就可以完成培养细胞的细胞核蛋白、细胞浆蛋的分离。抽提得到的蛋白可以用于 Western,EMSA,footprinting,报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。
产品组分:

使用方法: 操作流程:一、试剂准备1、准备溶液(1)室温融解试剂盒中的各种溶液,溶解后除结构蛋白提取液外,其他试剂立即置于冰上;2、蛋白提取工作液的准备(1) 胞浆蛋白提取工作液的准备:临用前,根据处理样品的量估算实验时胞浆蛋白提取液的需要量,并分别按照1:50 比例加入磷酸酶抑制剂II 和1:100 比例加入蛋白酶抑制剂PMSF。(2)胞核蛋白提取工作液的准备:临用前,根据处理样品的量估算实验时胞核蛋白提取液的需要量,并分别按照1:50 比例加入磷酸酶抑制剂II 和1:100 比例加入蛋白酶抑制剂PMSF。二、对于培养细胞样品1、胞浆蛋白提取(1)加 2.0ml(2.0×10⁷细胞)胞浆蛋白提取工作液, 在 4°C 条件下震荡 20 分钟。(2)准备1ml的注射器,用注射器吹打1步聚震荡过的溶液50-90次,在4°C条件下,15000g离心 10 分钟。取上清液存于 EP 管中,即为细胞浆蛋白。2、胞核蛋白的提取(1)取步骤 2.1.2 中获得的离心沉淀,在冰浴条件下加 4.0ml(2.0×107细胞)胞浆蛋白提取工作液,在 4°C 条件下震荡 5 分钟,4°C 条件下 15000g 离心 10 分钟,弃去上清液。(2)加 1.0ml(2.0×10⁷细胞)冰冻的胞核蛋白提取工作液, 在 4°C 条件下震荡 5 分钟,4°C条件下 15000g 离心 10 分钟,上清液为细胞核蛋白,转入 EP 管并保存。(3)待检测浓度的蛋白存于-70°C。三、对于组织样品:1、胞浆蛋白提取(1)加 2.0ml/g 的胞浆蛋白提取工作液,在 4°C 条件下研磨,至全部溶解;(2)震荡 5 分钟,在 4°C 条件下,18000g 离心 10 分钟。取上清液存于 EP 管中,即为胞浆蛋白;2、胞核蛋白的提取(1)取步骤 3.1.2 中的沉淀物中加 4.0ml/g 的胞浆蛋白提取工作液,在 4°C 条件下震荡 5 分钟,4°C 条件下 18000g 离心 10 分钟,弃去上清液;(2)加 1.0ml/g 冰冻的胞核蛋白提取工作液, 在 4°C 条件下震荡 5 分钟,4°C 条件下 18000g离心 10 分钟,上清液为细胞核蛋白,转入 EP 管并保存;(3)待检测浓度的蛋白存于-70°C。

储存/保存方法: -20°C 保存,有效期12个月。

注意事项: 1、为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。建议可适当分装后使用;
2、所有接触样品的用具及试剂均需预冷。裂解蛋白的所有步骤都需在冰浴或 4°C 进行;
3、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
4、在具体的实验操作中,可按照 2.0ml(2.0×10⁷细胞)或者 2.0ml/g 的比例调整试剂盒中 各种裂解液的使用量。

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