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| 品牌 | 爱必信(absin) |
| 货号 | abs9905 |
| 用途 | 见爱必信官网 |
| 包装规格 | 10ml |
| 纯度 | % |
| 是否进口 | 否 |
| 公告提醒:爱必信所有产品和服务仅用于科学研究,不用于及其他用途提供产品和服务(也不为任何个人提供产品和服务)!
产品描述: 产品名称:Protein G抗体纯化琼脂糖磁珠 描述: 【产品介绍】Protein G琼脂糖磁珠以交联琼脂糖为基质,Protein G被在磁性微球表面。与同类产品相比,Protein G琼脂糖磁珠表面具有更多的抗体结合 位点。在IP实验中,只需使用更少的磁珠量,非特异性结合低,使用简便有效,具有大面积特异的表面区域,从而大大缩短抗体吸附和抗原结合的时间,可以在 30 分钟内完成 完整的IP实验。此产品适用的范围广泛,例如细胞裂解液、细胞分泌液上清、血清、动物腹水。 【产品规格】
【产品特点】抗体结合位点丰富;非特异性吸附低。 【作用对象】适用于细胞裂解液、细胞分泌液上清、血清、动物腹水以及其它的免疫抗原等。 【注意事项】 1. 进行免疫沉淀操作之前,请务必认真阅读本操作说明书;2. 本产品须与磁性分离器配套使用; 3. 磁珠应保存在储存溶液中,防止干燥; 4. 请勿将磁珠冷冻或离心,以免引起不可逆聚集; 5. 为保证最佳的实验结果,请选择特异性较强的抗体进行免疫沉淀反应; 6. 操作者可根据实际需求,利用抗体结合反应步骤以及抗原结合反应步骤中收集的上清 液检测抗体、抗原和磁珠的结合情况; 7. 对于IP实验,不同类型的抗体与抗原结合的亲和性是有区别的,抗体与抗原结合还会 受到结合缓冲液和洗涤缓冲液的影响,因此,如果操作者使用本试剂盒提供的缓冲体系 不能获得很好的实验结果,可自行筛选及配制缓冲液进行实验; 8. 本磁珠表面包被的重组蛋白Protein A在极端条件下(如低 pH、加热处理)存在极低 的蛋白脱落情况; 9. 不建议操作者用于分子量约130 kD 目标蛋白的免疫沉淀实验; 10. 本产品仅供研究使用。 使用方法: 【操作流程 】 推荐缓冲液
【抗原样品制备】 本操作说明书提供以下四种样品处理方法,建议您根据不同来源的抗原样品选择适当的方式进行预处理,使待检测抗原释放至样品溶液中。 血清样品处理:若目标蛋白丰度较高,建议用 Binding Buffer 稀释血清样品至目标蛋白终浓度为 10~100 μg/mL,置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。 悬浮细胞样品处理:离心收集细胞(4℃,500 g,10 min),弃上清后称重,按 1.0?10^5个细胞20~30 μL的比例加入 PBS 洗涤2次;按1.0?10^5个细胞20~30μL的比例加入NP40 Cell Lysis Buffer,同时加入蛋白酶抑制剂(如终浓度为1mM的PMSF),混匀后置于冰上处理10min;离心收集上清液(4℃,14000 g,10 min),置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。 贴壁细胞样品处理:移去培养基,用 PBS 洗涤两次;用胰酶消化或者细胞刮刀,收 集至 1.5 mL 离心管内,按 1.0?10^5个细胞 20~30 μL 的比例加入PBS 洗涤 2 次;按 1.0?105个细胞20~30 μL的比例加入NP40 Cell Lysis Buffer,同时加入蛋白酶抑制剂(如终浓 度为1 mM的PMSF),混匀后置于冰上处理 10min;离心收集上清液(4℃, 14000 g, 10 min),置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。 大肠杆菌样品处理:离心收集大肠杆菌(4℃, 12000 g, 2 min),弃上清后称重,按 每克(湿重)菌体10 mL 的比例用 PBS 洗涤 2 次;按每克(湿重)菌体 5~10 mL 的比 例加入Binding Buffer,同时加入蛋白酶抑制剂(如终浓度为 1 mM 的 PMSF),重悬菌体,超声裂解细胞,离心收集上清(4℃, 17000 g, 10 min)。
【磁珠预处理】 1. 移液器吹打或漩涡振荡器混匀磁珠,取 50μL 磁珠悬浮液(10%,v/v)至离心管中,5mL磁力架磁性分离去除保存液;注:客户可根据实际需要适当增减;2. 加入100 μL PBS 混匀磁珠(颠倒 30 秒或者旋涡振荡器混匀),磁性分离去除上清液(重复 2 次); 【抗体结合】 1. 用100μLPBST 稀释 2~20μg 抗体样品(如样品体积大于100ul则不需要稀释),稀释后加入到装有磁珠的离心管中;注:实际抗体使用量需根据实验摸索,可参看磁珠对应不同抗体亚型的亲和力表;2. 将上述混合物放入摇床或旋转混合仪室温或 37℃颠倒混匀或者涡旋混匀 10~15 分钟; 3. 将装有磁珠和抗体的离心管放入磁力架,待磁珠完全贴壁后,去除上清液; 4. 用100μLPBST 洗涤磁珠-抗体复合物 3 次。 【抗体交联反应】(备选) 如操作者需要将抗体和目标抗原复合物共同洗脱,请忽略本步骤,直接进行下一步骤;本步骤适用于操作者需要单独洗脱目标抗原的试验,推荐使用BS3(Thermo Scientific, Cat. #21580)作为交联剂,相关实验请参照该试剂的操作说明。 【抗原沉淀反应】 1. 抗原吸附:向上一步装有磁珠-抗体复合物的离心管中加入制备好的细胞裂解液100~1000μL,用移液枪吹打混匀;2. 37℃颠倒混匀或者低速涡旋混匀15~20 分钟,使抗原和结合抗体的磁珠结合;注:为使集合更充分,孵育时间和稳定可根据实际需求进行调整; 3. 将上一步的离心管和混合物放入磁力架,吸取上清(上清可丢弃也可保存做后续分析); 4. 取 200μL PBS 洗涤磁珠-抗体-抗原复合物 3 次; 5. 洗涤完成后用100μLPBS重悬磁珠,用于下一步操作。 注:抗原洗脱前务必将磁珠转移新的离心管,避免将管壁上原有的非特异性吸附蛋白一起洗脱 【抗原洗脱】 本操作说明书提供以下两种抗原洗脱方案,操作者可根据后期检测的需要选择不同的抗原洗脱方法。 变性洗脱法: 1. 将沉淀抗原第5步骤中的磁珠放入磁力架,磁性分离去除上清液; 2. 向离心管中加入约30μL的Elution Buffer,用移液器轻轻混匀避免气泡产生,颠倒混匀 或者低速涡旋混匀2~5分钟; 3. 将磁珠放入磁力架,磁性分离收集上清(注:上清液中含有抗原勿丢弃); 4. 中和:上述步骤收集上清中抗原,若需做功能验证需加入Neutralization Buffer中和洗脱液(例入100μLElution Buffer加入10 μL Neutralization Buffer即可)。 【磁珠后处理】 使用后的磁珠用Elution buffer洗涤2次,磁性分离,弃上清液;接着用Binding/Washing buffer洗涤3次,磁性分离,弃上清液,加入200 μL Storage buffer重悬磁珠 ,置于2~8℃保存。 【磁珠再生】 1. 磁珠多次使用后会有沉淀蛋白、强疏水性蛋白、脂蛋白等杂质非特异性吸附到磁珠上,为了保证磁珠的使用效率,建议持续使用5次后进行磁珠再生处理。 按约每1 mL 10%(v/v)磁珠加入1 mL 1%(v/v)Triron X-100 磁珠再生缓冲液, 振荡均匀,在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转混合,10 min 后进行磁性分离, 弃上清液。 2. 立即加入1 mL Binding/Washing buffer 进行重悬,然后磁性分离,弃上清液,重复该 操作 3 次。 3. 加入 1 mL Storage buffer 重悬磁珠 ,置于 2~8℃保存。
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