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产品描述:

产品名称:Chaperone competent cells pG-KJE8/BL21(DE3)

描述:

本制品是由转化了一种伴侣蛋白质粒(Chaperone Plasmid)pG-KJE8的E. coli BL21(DE3)制成的感受态细胞。
 E.coli普遍用作蛋白质表达的宿主,因为其表达系统简单且有广泛选择。然而,在E.coli中表达的外源蛋白质常常会遇到各种问题,例如,形成不溶的包涵体(Inclusion   bodies)以及被蛋白酶降解等。原因大多是表达的蛋白质没有进行正确的折叠造成的。
众所周知,分子伴侣参与蛋白质折叠过程,且人们已经通过大量的实验研究来表明体内蛋白折叠机理。 本制品中含有pG-KJE8质粒,该质粒是能有效表达一组协同作用、共同参与蛋白折叠的被称作''Chaperone   team''的分子伴侣。靶蛋白与''Chaperone team''共同表达,便可增加可溶性蛋白质的比例。
如果使用本产品,只需一步转化就可构建靶蛋白与''Chaperone   team''的共表达体系。该产品非常适合pCold系列载体的表达,也适合于启动子为T7的蛋白质表达体系,如pET系列。
注意:本产品不可用于电击法转化

产品特点:

本制品中含有伴侣蛋白质粒pG-KJE8,可增加可溶性蛋白质的比例;

适用于pCold,pET系列蛋白质表达体系。
产品组分:

实验方法:

(1)取感受态细胞置于冰浴中,一次转化感受态细胞的用量为 50-100ul,可根据实际情况分装使用。所用 DNA 的体积不要超过感受态细胞的十分之一,以下实验以 100ul 感受态细胞为例。

(2)待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的 DNA(通常 100ul 感受态细胞能够被 1ng超螺旋质粒 DNA 所饱和),用移液枪吹打混合,冰上放置 30 分钟。

(3)将离心管置于 42℃水浴中,热击 60-90 秒,迅速将离心管置于冰上,放置 2-3 分钟。

(4)向每个离心管中加入 500ul 无菌不含抗生素的 LB 或 SOC 培养基中,37℃摇床,150rpm 振荡培养 45 分钟,使质粒上相关抗性基因表达,菌体复苏。

(5)吸取 200ul 已转化的感受态细胞,加到含氯霉素和质粒上相应抗生素的LB 或SOC 固体平板上,用无菌涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于 37℃培养箱里直至液体完全吸收,倒置培养 12~16 小时。涂布量应根据具体实验调整,如果转化的 DNA 总量较多,可取少量转化产物涂布平板,如果预计的克隆数较少,可 3000rpm 离心 5 分钟,吸取部分培养基,悬浮菌体后涂布在一个平板上。涂布剩余的菌液在置于 4℃冰箱中保存,如果第二日转化菌落数过少,可以将剩余菌液再涂布在新的平板上。

储存/保存方法: -80℃

技术指标:

基因型:E.coli BL21(DE3)来源于 B 株,为 Lon 蛋白水解酶、ompT外膜蛋白水解酶缺陷型。

转化效率:使用pUC19质粒检测,转化效率≥1×10⁶cfu/μg。

注意事项: (1)感受态细胞应保存于-80℃冰箱中,不可反复冻融,或放置时间过长,避免感受态转化效率降低。
(2)实验操作时,应注意无菌条件。
(3)实验过程中,可保留部分连接反应液,当转化不成功时,可重新转化。

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