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产品描述:

产品名称:DNA Gel/PCR Purification Kit

描述: 本试剂盒采用独特的离心吸附柱,既能从TAE或TBE琼脂糖凝胶中回收DNA片段,又能用于直接纯化PCR产物。 溶液PC中含有pH指示剂,可根据颜色来判断溶胶或PCR产物回收是否达到。使用本产品可回收100 bp-20 kb大小的DNA片段,回收率可达80%。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。

使用建议:

如果所提质粒为低拷贝质粒或大10kb的大质粒,应加大菌体使用量,使用5~10ml过夜培养物,同时按照比例增加P1、P2、P3的用量,洗脱缓冲液EB应在65~70℃水浴预热,在吸附和洗脱时可以适当的延长时间,以增加提取效率。其它步骤相同。
产品组分:

实验方法:

漂洗液 PW 在使用前按照试剂瓶所示加入 60 ml 无水乙醇,混合均匀。

注意:100mg 凝胶块需加入 100ul 的溶液 PC,确保加入不小于 1 倍体积的溶液 PC;纯化小于 200bp 的片段,加入 1 倍体积的异丙醇(100mg 凝胶块或 100ulPCR 反应液加入 100ul 异丙醇)。

2、转移以上混合液(每次不超过 700ul)至一个带有收集管(Collection Tube)的吸附柱(Spin Column)中,室温下,13000 rpm 下离心1min,弃废液,将吸附柱放回收集管中。

3、重复步骤 2,直至剩余的混合液全部通过吸附柱。

4、加入 350ul 漂洗液 PW(Buffer PW)至吸附柱中,室温下 13000 rpm下离心 30s,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。

5、重复步骤 4。

6、室温下,13000 rpm 下,将吸附柱开盖离心 2min,除去残留的乙醇。

注意:开盖离心有利于乙醇的去除,乙醇的残留将影响下游实验,可以适当延长离心时间,并且离心后开盖空气中放置几分钟。

7、转移吸附柱至一个新的 1.5ml 收集管中,加入30-50ul 60℃预热的洗脱缓冲液 EB(Buffer EB)或ddH2O 至吸附柱膜中央,室温静置 1min,13000 rpm下离心 1min 以洗脱 DNA,如果想提高收获量,将洗脱液加入到吸附柱中重新洗脱一次。

注意:洗脱体积不应小于30μl,体积过少影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若后续做测序需使用ddH2O做洗脱液,并保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率; 且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA 降解。DNA也可以用缓冲液(10mM Tris-Cl,  pH8.0)  洗脱。为了提高DNA的回收量,可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中,室温放置2min,13000rpm离心2min,将DNA溶液收集到离心管中。

储存/保存方法: 该试剂盒在室温条件下,可保存12个月,更长时间保存可置于4℃。 若溶液产生沉淀,可在室温下放置一段时间,或在37℃水浴中预热10min,以溶解沉淀。

注意事项: 1、溶液PC 在低温运输或者保存过程中可能会生成沉淀,如果有沉淀生成,请在37 ℃溶解再使用。
2、洗脱前,在55-60 ℃水浴预热洗脱缓冲液EB(Buffer EB)。

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