公告提醒:爱必信所有产品和服务仅用于科学研究,不用于及其他用途提供产品和服务(也不为任何个人提供产品和服务)! 产品描述: 产品名称:One-Step RT-PCR Kit 描述: One-Step RT-PCR Kit一步法RT-PCR试剂盒具有方便、快速、灵敏度高、重复性好等特点。该试剂盒能以动物、植物和微生物的总RNA或mRNA为模板,cDNA合成和PCR反应在一个管中进行,反转录结束后可直接进行PCR循环而不用增加额外的步骤;同时可对低至1fg的总RNA进行扩增,有助于大量样品的处理并减少污染机会。 产品组分: 组分 | 体积 | RT Enzyme Mix | 200ul | 2× One-Step RT-PCR SuperMix | 1ml×2 | RNase Free Water | 1ml×2 |
产品特点: 效率高,可反转录GC含量高,二级结构复杂的RNA模板。 独特的缓冲体系使反转录酶和聚合酶同时发挥最大功效。 操作简单,可最大限度的避免污染。 实验方法: 1、将 RNA 模板、引物、2×One-Step RT-PCR SuperMix,RT Enzyme Mix 和RNase Free Water 溶解并置于冰上备用。 2、配置以下反应体系:
模板RNA | 0.1ng-5ug | RT Enzyme Mix | 1ul | 2×One-Step RT-PCR SuperMix | 10ul | 上游引物(10μM) | 0.5-1ul | 下游引物(10μM) | 0.5-1ul | RNase Free Water | 至 20ul | 3、轻轻混匀后短暂离心,使管壁上的溶液收集到管底。 4、常用反应程序:
42℃ | 5min/5000bp | 95℃ | 5 分钟 | 25-30 次循环: | 94℃,20 秒 | 50-60℃,20 秒 | 72℃,1kb/60 秒 | 72℃ | 5 分钟 | 4℃ | 保温 |
储存/保存方法: -20℃ 注意事项: 1、本试剂盒PCR扩增延伸时间为1kb/min,客户可根据具体片段长度进行延伸时间的调整。 2、通常情况,28~30个循环可达到最佳扩增,对于低拷贝目的基因的检测,可将循环数增加到40个。 3、如果同时操作多个样品,建议先在冰上先配制预混液,然后再分装到各个反应管中,加入模板启动反应。 4、反应出现目标条带拖带,系模板浓度过高或特异引物浓度不适等原因所致,可对模板及引物浓度等进行调整;反应出现杂带,可对退火温度进行调整,或重新设计特异性高的引物。 5、本试剂盒只需使用特异性反转录引物,无需使用Random Primer和OligodT Primer等进行反转录反应。 6、为了保证反应的正常进行,需使用高质量的RNA模板。 产品信息订购: 产品货号 | 产品名称 | 规格 | 价格 | 大包装及货期 | abs60074 | One-Step RT-PCR Kit | 200次 | 1680.00 | 立即咨询 | 产品更多信息请进入爱必信网站咨询 |