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产品描述:

产品名称:Stbl4感受态细胞

描述: Stbl4菌株来源于Stbl2菌株(Stbl2为JM109衍生菌株),用于克隆不稳定序列(如重复序列,逆转录病毒序列等)和甲基化的DNA序列,特别适合构建重组逆转录病毒或慢病毒质粒。可用于大质粒的构建和扩增,适用于构建和扩增质粒cDNA文库。区别于Stbl2菌株,Stbl4菌株在IPTG和X-gal存在的条件下,可进行α互补原理的蓝白斑筛选实验。感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率大于10⁸ cfu/μg。
基因型:
mcrA Δ(mcrBC-hsdRMS-mrr)recA1endA1gyrA96gal-thi-1supE44 λ- relA1 Δ(lac-proAB)/F′ proAB+ lacIqZΔM15 Tn10 (TetR)
菌株抗性:
对氨苄青霉素,卡那霉素,壮观霉素敏感,对四环素有抗性。

使用方法: 质粒转化步骤:1、将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后,加入质粒 DNA 或 5-10μl 连接产物到细胞中,用手 指拨打管底,轻轻混匀;2、冰水浴中放置 15-30 分钟,不要晃动;3、42℃热击 60 秒钟,不要晃动;4、冰水浴中放置 2 分钟,不要晃动;5、加入 500μl 无菌的 SOC 或 LB 培养基;6、置于 37℃摇床中,150-200rpm 震荡复苏培养 60 分钟;7、取 50-100μl 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上。待液体吸干后,倒置平板,37℃培养 12-16 小时。(当克隆不稳定片段时,为了降低重组错误率,复苏培养和涂布培养最好采用 30℃的培养条件,平板在 30℃ 培养时需要 24 小时左右。) 平板划线分离法:复苏培养结束后,12000rpm 离心 30 秒钟,弃掉上清,留 100μl 左右的液体,用 200μl 吸 头轻轻吹打散菌块,取 10μl 重悬的菌液分多点滴在抗性 LB 平板上,倾斜吸头,用吸头头部的侧面将滴在平 板上的液体来回划线。37℃培养过夜。这个方法可以获得更多更大的单克隆菌落。

储存/保存方法: -70℃保存,避免反复冻融

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