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产品描述:

产品名称:Stable 感受态细胞

描述: Stable感受态细胞是采用Stable菌株经特殊工艺制备得到的感受态细胞。Stable菌株特别适用于具有末端重复序列的逆转录病毒或慢病毒质粒的构建和扩增,也适用于重复DNA序列的克隆和扩增。Stable具有与Stbl3和Stbl4完全不同的基因型,比Stbl3和Stbl4生长速度更快,性能更好。核酸内切酶 (endA1)基因的缺失有利于提高质粒DNA的产量和质量。ΔlacZM15基因的存在可用于蓝白斑筛选。菌株还具有抗T1噬菌体感染的特点。Stable感受态细胞经pUC19质粒检测转化效率>10⁸ cfu/μg DNA。
基因型:
F′ proA+B+ lacIq Δ(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR)/Δ(ara-leu) 7697 araD139 fhuA ΔlacX74 galK16 galE15e14- f80dlacZΔM15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (StrR) rph spoT1 Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)
菌株抗性:
对氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、壮观霉素和呋喃妥因敏感。具有四环素和链霉素抗性。

使用方法: 质粒转化步骤:1、将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后,加入 1-5μl 含有 1-100ng 的质粒 DNA 或 5-10μl 连接产物到细胞中,用手指拨打管底,轻轻混匀。2、冰水浴中放置 30 分钟,不要晃动。3、42℃热击 60 秒钟,不要晃动。4、冰水浴中放置 2 分钟,不要晃动。5、加入 500μl 的室温的 SOC 或 LB 培养基。6、置于 37℃摇床中,150-200rpm 震荡复苏培养 60 分钟。7、取 50-100μl 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上。待液体吸干后,倒置平板,37℃培养 12-18 小时。平板划线分离法:复苏培养结束后,12000rpm离心30秒钟,弃掉上清,留100μl左右的液体,用200μl吸头轻 轻吹打散菌块,取10μl重悬的菌液分多点滴在平板上,倾斜吸头,用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更大的单克隆菌落。此方法主要适用于质粒转化,连接产物转化最好用涂布法。质粒快速转化步骤:对于氨苄青霉素抗性的质粒,将步骤 2 的时间缩短到 5 分钟,步骤 4 完成后,可直接涂 布或划线于含氨苄青霉素抗性的 LB 平板上。其它抗性的质粒仍需 60 分钟的复苏培养。

储存/保存方法: -70℃保存,避免反复冻融

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