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产品描述:

产品名称:TG1感受态细胞

描述: TG1菌株来源于大肠杆菌K-12,主要用于噬菌体展示(Phage Display),也可进行M13噬菌体相关的实验,也可用于普通质粒的克隆构建及提取。lacZΔM15的存在可进行α互补原理上的蓝白斑筛选实验。由于该菌株不含核酸酶endA1突变,提取的质粒中核酸酶含量较高,需用去蛋白液处理。TG1感受态细胞由特殊工艺制成,经pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μg DNA。
基因型:
supE thi-1 _(lac-proAB) _(mcrB-hsdSM)5(rK– mK–) [F′ traD36 proAB lacIqZ _M15]
菌株抗性:
对氨苄青霉素、卡那霉素、壮观霉素、博莱霉素、庆大霉素、氯霉素和四环素敏感。

使用方法: 质粒转化步骤:(以氨苄青霉素抗性的 pUC19 质粒为例)1、将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后,加入 1-5μl 含有 1-100ng 的质粒 DNA 到细胞中,用手指拨打管底,轻轻混匀。2、冰水浴中放置 30 分钟,不要晃动。3、42℃热击 60 秒钟,不要晃动。4、冰水浴中放置 2 分钟,不要晃动。5、加入 500μl 的室温的 SOC 或 LB 培养基。6、置于 37℃摇床中,150-200rpm,复苏培养 60 分钟。7、取 50-100μl 菌液涂布在含有氨苄青霉素抗性的 LB 平板上。待液体吸干后,倒置平板 37℃培养 12-24 小时。平板划线分离法:复苏培养结束后,12000rpm 离心 30 秒钟,弃掉上清,留 100μl 左右的液体,用 200μl 吸头轻轻吹打散菌块, 取 10μl 重悬的菌液分多点滴在平板上,倾斜吸头,用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更大的单克隆菌落。

储存/保存方法: -70℃保存,避免反复冻融

注意事项: 1、化冻的感受态细胞不能长时间放置,影响转化效率;
2、感受态细胞避免反复冻融;
3、操作过程要轻柔,避免用移液枪反复吹打;
4、整个转化过程应注意无菌操作,避免污染。

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