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产品描述:

产品名称:DH5α-T1感受态细胞

描述: DH5α-T1为常规DH5α改进型菌株。缺失核酸酶(endA1)基因,提高质粒的产量和质量;重组酶缺陷型(recA1)减少插入片段的同源重组概率,保证了插入DNA的稳定性。由于lacZΔM15的存在以及lacIq基因的缺失,故不需要加IPTG,只需要添加X-gal就可以进行基于α互补原理上的蓝白斑筛选实验。DH5α-T1在基因组tonA区域的突变使菌株获得抵抗T1和T5噬菌体感染的能力。DH5α-T1感受态细胞由特殊工艺制成,pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μg DNA。
基因型:
F- φ80lacZΔM15 Δ(lacZYA-argF)U169 recA1 endA1 hsdR17(rk-, mk+) phoA supE44 thi-1 gyrA96 relA1 tonA
菌株抗性:
对氨苄青霉素、卡那霉素、壮观霉素、博莱霉素、庆大霉素、氯霉素和四环素敏感。

使用方法: 质粒转化步骤:(以氨苄青霉素抗性的 pUC19 质粒为例)1、将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后,加入 1-5μl 含有 1-100ng 的质粒 DNA 到细胞中,用手指拨打管底,轻轻混匀。2、冰水浴中放置 30 分钟,不要晃动。3、42℃热击 60 秒钟,不要晃动。4、冰水浴中放置 2 分钟,不要晃动。 5、加入 500μl 的室温的 SOC 或 LB 培养基。6、置于 37℃摇床中,150-200rpm,复苏培养 60 分钟。7、取 50-100μl 菌液涂布在含有氨苄青霉素抗性的 LB 平板上。待液体吸干后,倒置平板 37℃培养 12-24 小时。平板划线分离法:复苏培养结束后,12000rpm 离心 30 秒钟,弃掉上清,留 100μl 左右的液体,用 200μl 吸头轻轻吹打散菌块, 取 10μl 重悬的菌液分多点滴在平板上,倾斜吸头,用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更大的单克隆菌落。

储存/保存方法: -70℃保存,避免反复冻融

注意事项: 1、化冻的感受态细胞不能长时间放置,影响转化效率;
2、感受态细胞避免反复冻融;
3、操作过程要轻柔,避免用移液枪反复吹打;
4、整个转化过程应注意无菌操作,避免污染。

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