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产品描述:

产品名称:dam-/dcm-感受态细胞

描述: dam-/dcm-感受态细胞是采用大肠杆菌dam-/dcm-菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞。dam-/dcm-菌株来源于大肠杆菌K12菌株,该菌株为dam和dcm甲基化酶失活突变型菌株,常用于质粒DNA的去dam和dcm甲基化处理,消除dam和dcm甲基化对酶切的影响。核酸内切酶 (endA1)基因的缺失有利于提高质粒DNA的产量和质量。甲基化酶的失活突变可能会导致质粒DNA在该菌株中会出现突变,不建议连接产物的转化实验,仅用于质粒转化。菌株还具有抗T1噬菌体感染的特点。pUC19质粒检测转化效率>×10⁶ cfu/μg DNA。
基因型:
ara-14 leuB6 fhuA31 lacY1 tsx78 glnV44 galK2 galT22mcrA dcm-6 hisG4 rfbD1 R(zgb210::Tn10) TetS endA1 rspL136 (StrR)dam13::Tn9 (CamR) xylA-5 mtl-1 thi-1 mcrB1 hsdR2
菌株抗性:
对氯霉素、链霉素有抗性;对氨苄青霉素、卡那霉素、壮观霉素和四环素敏感。

使用方法: 质粒转化步骤:1、将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后,加入 1-5μl 含有 1-100ng 的质粒 DNA 到细胞中,用手指拨打管底,轻轻混匀。2、冰水浴中放置 30 分钟,不要晃动。3、42℃热击 60 秒钟,不要晃动。4、冰水浴中放置 2 分钟,不要晃动。5、加入 500μl 的室温 SOC 或 LB 培养基。6、置于 37℃摇床中,150-200rpm 震荡复苏培养 60 分钟。7、取 50-100μl 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上。待液体吸干后,倒置平板,37℃培养 12-18 小时。 平板划线分离法:复苏培养结束后,12000rpm 离心 30 秒钟,弃掉上清,留 100μl 左右的液体,用 200μl 吸头轻轻吹打散菌块,取 10μl 重悬的菌液分多点滴在平板上,倾斜吸头,用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更大的单克隆菌落。此方法主要适用于质粒转化,连接产物转化最好用涂布法。质粒快速转化步骤:将步骤 2 的时间缩短到 5 分钟,对于氨苄青霉素抗性的质粒,步骤 4 完成后,可直接涂布或划线于含氨苄青霉素抗性的 LB 平板上。其它抗性的质粒仍需 60 分钟的复苏培养。

储存/保存方法: -70℃保存,避免反复冻融

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