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产品描述:

产品名称:T7pLysY感受态细胞

描述: T7pLysY菌株为大肠杆菌BL21增强型菌株,为Lon和OmpT蛋白酶缺陷型,用于毒性或非毒性蛋白的表达。该菌株区别于BL21(DE3)pLysS和BL21(DE3)pLysE菌株的优势在于T7 RNA聚合酶基因整合在细菌染色体上的lac操纵子区域,基因组中无λ前噬菌体序列,LysY表达的T7溶菌酶保留了对T7 RNA聚合酶的但缺失了水解细胞壁的酰胺酶活性,有利于降低基因的背景表达和避免诱导过程中细菌的裂解,菌株具有抗T1噬菌体感染等特点。T7pLysY表达感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率大于10⁸ cfu/μg。
基因型:
fhuA2lacZ::T7gene1[lon]ompTgalsulA11R(mcr-73::miniTn10--TetS)2[dcm]R(zgb-210::Tn10--TetS)endA1D(mcrC-mrr)114::IS10 lysY (CamR)
菌株抗性:
对氨苄青霉素,壮观霉素,卡那霉素,链霉素和四环素敏感,对氯霉素有抗性。

使用方法: 质粒转化步骤:1、将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后,加入质粒DNA 到细胞中,用手指拨打管底,轻轻混匀;2、冰水浴中放置15-30 分钟,不要晃动;3、42℃热击 60 秒钟,不要晃动;4、冰水浴中放置2 分钟,不要晃动;5、加入 500μl 无菌的 SOC 或 LB 培养基;6、置于 37℃摇床中,150-200rpm 震荡复苏培养 60 分钟;7、取 50-100μl 菌液涂布在含 34μg/ml 氯霉素及所选质粒筛选抗生素的 LB 平板上。待液体吸干后,倒置 平板,37℃培养 12-16 小时。平板划线分离法:复苏培养结束后,12000rpm 离心 30 秒钟,弃掉上清,留 100μl 左右的液体,用 200μl 吸头轻轻吹打散菌块,取 10μl 重悬的菌液分多点滴在抗性 LB 平板上,倾斜吸头,用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。37℃培养过夜。这个方法可以获得更多更大的单克隆菌落。蛋白表达步骤:1、挑取单菌落,接种到5ml 含34μg/ml 氯霉素及所选质粒筛选抗生素的LB 培养基中。2、37℃,200rpm 震荡培养细菌至对数生长期(OD600=0.4-0.8)。3、加入 IPTG 到终浓度为 0.4mM,37℃诱导 2-4 小时或 16℃诱导过夜。4、诱导完成后,离心收集菌体,用合适的方法(如考马斯亮蓝染胶法,Western-Blot法或酶活性分析法) 分析菌体裂解物的总蛋白、上清和沉淀组分,明确表达产物的表达状况(可溶性或不溶性表达)。5、大量表达时,可用 10ml 过夜培养物转接到 1L 培养基中,当培养到 OD600=0.4-0.8 时,加入终浓度为 0.4mM的 IPTG,37℃诱导 2-4 小时或 16℃诱导过夜(不同蛋白表达的最佳条件有所不同,需在实验中优化)。

储存/保存方法: -70℃保存,避免反复冻融

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