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产品描述:

产品名称:OverExpress C41(DE3)感受态细胞

描述: OverExpress C41(DE3)菌株适用于毒性蛋白的表达,来源于BL21(DE3)菌株。OverExpress C41(DE3)是通过毒性蛋白在BL21(DE3)内过表达筛选实验得到的基因突变菌株,该菌株的基因突变降低了T7 RNA聚合酶的酶活性,下调毒性蛋白的表达量使细胞存活。OverExpress C41(DE3)菌株也可以表达常规蛋白,相同条件下,蛋白表达量略低于BL21(DE3)菌株。OverExpress C41(DE3)菌株属于B菌株,lon和ompT蛋白酶缺陷型。OverExpress C41(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率可达1×107 cfu/μg DNA。
基因型:
F-ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm (DE3) 
菌株抗性:
对氨苄青霉素,卡那霉素,氯霉素和四环素敏感。

使用方法: 质粒转化步骤(以氨苄青霉素抗性的 pET 质粒为例):1、将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后,加入 1-5 μl 含有 1-100 ng 的质粒 DNA 到细胞中,用手指拨打管底,轻轻混匀。 2、冰水浴中放置 30 分钟,不要晃动。3、42℃热击 60 秒钟,不要晃动。4、冰水浴中放置 2 分钟,不要晃动。5、加入 500 μl 的室温的 SOC 或 LB 培养基。6、置于 37℃摇床中,150-200 rpm,复苏培养 60 分钟。7、取 50-100 μl 菌液涂布在含有氨苄青霉素抗性的 LB 平板上。待液体吸干后,倒置平板 37℃培养 12-24 小时。平板划线分离法:复苏培养结束后,12000 rpm 离心 30 秒钟,弃掉上清,留 100 μl 左右的液体,用 200 μl 吸头轻轻吹打散菌块, 取 10 μl 重悬的菌液分多点滴在平板上,倾斜吸头,用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更多更大的单克隆菌落。蛋白表达步骤:1、挑取单菌落,接种到含 5 ml 带抗生素的 LB 培养基中。2、37℃,200 rpm 震荡培养细菌至对数生长期(OD600=0.4-0.8)。3、加入 IPTG 到终浓度为 0.4 mM,37℃诱导 4 小时或 16℃诱导过夜。(可以设定不同浓度的 IPTG 来诱导表达。)4、诱导完成后,离心收集菌体,用合适的方法(如考马斯亮蓝染胶法,Western-Blot法或酶活性分析法)分析菌体裂解物的总蛋白、上清和沉淀组分,明确表达产物的表达状况(可溶性或不溶性表达)。重组蛋白大量表达时,可用 10 ml 过夜培养物转接到 1 L 培养基中,当培养到 OD600=0.4-0.8 时,加入终浓度为 0.4 mM 的 IPTG, 37℃诱导 4 小时或 16℃诱导过夜(不同蛋白表达的最佳条件有所不同,需在实验中优化)。

储存/保存方法: -70℃保存,避免反复冻融

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