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产品描述:

产品名称:细菌基因组DNA快速提取试剂盒

描述: 本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统提取细菌的基因组DNA。离心吸附柱中材料为本公司特有新型材料,能够高效、专一吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
提取得率:

使用方法: 使用前请先在漂洗液 WB 中加入无水乙醇。 1、取细菌培养液 1-5ml,10,000rpm(~11,500×g)离心 1min,尽量吸净上清。 2、向菌体沉淀中加入 200μl 裂解液 TL,振荡至菌体彻底悬浮。 注意:对于较难破壁的革兰氏阳性菌,可略过第 2 步骤,加入溶菌酶进行破壁处理, 具体方法为:加入 180μl 缓冲液 TB+溶菌酶(终浓度为 20mg/ml 的溶菌酶(溶菌酶必须 用溶菌酶干粉溶解在缓冲液 TB 中进行配制,否则会导致溶菌酶无活性),37℃处理 30min 以上。如果需要去除 RNA,可加入 3μl RNase A(10mg/ml)溶液,振荡 15sec, 室温放置 5min。 3、向管中加入 20μl 蛋白酶 K 溶液,混匀。 4、加入 220μl 结合液 CB,振荡 15sec,70℃放置 10min,溶液应变清亮,简短离心以 去除管盖内壁的水珠。 注意:加入结合液 CB 时可能会产生白色沉淀,一般 70℃放置时会消失,不会影响 后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取 DNA 量少和提取 出的 DNA 不纯。 5、加 220μl 无水乙醇,充分振荡混匀 15sec,此时可能会出现絮状沉淀,简短离心以去除管盖内壁的水珠。 6、将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱 AC 中(吸附柱放入收集管中), 12,000rpm 离心 30sec,倒掉废液,将吸附柱 AC 放入收集管中。 7、向吸附柱 AC 中加入 500μl 抑制物去除液 IR,12,000rpm 离心 30sec,倒掉废液,将 吸附柱 AC 放入收集管中。 8、向吸附柱 AC 中加入 600μl 漂洗液 WB(使用前请先检查是否已加入无水乙醇), 12,000rpm 离心 30sec,倒掉废液,吸附柱 AC 放入收集管中。 9、重复操作步骤 8。 10、将吸附柱 AC 放回收集管中,12,000rpm 离心 2min,倒掉废液。将吸附柱 AC 置于 室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。 注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的残留会影响后 续的酶反应(酶切、PCR 等)实验。 11、将吸附柱 AC 转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加 50-200μl 洗脱缓冲液 EB,室温放置 2-5min,12,000 rpm 离心 2min,将溶液收集到离心管中。 注意:洗脱缓冲液体积不应少于 50μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于 洗脱效率有很大影响。若用 ddH2O 做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;且 DNA 产物应保存在-20℃,以防 DNA 降解。为增加 基因组 DNA 的得率,可将离心得到的溶液再加入吸附柱 AC 中,室温放置 2min, 12,000rpm 离心 2min。 注意:DNA 浓度及纯度检测 得到的基因组 DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有 关。回收得到的 DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。 DNA应在OD260处有显著吸收峰,OD260值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40μg/ml 单链 DNA。OD260 /OD280 比值应为 1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用 ddH2O,比值会偏低,因为 pH 值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。

储存/保存方法: 室温保存,有效期12个月。

注意事项: 1、2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10min,以溶解沉淀。
2、样品应避免反复冻融,否则会导致提取的 DNA 片段较小且提取量也下降。
3、若裂解液 TL 或结合液 CB 中有沉淀,可在 37℃水浴中重新溶解,并摇匀后使用。
4、所有的离心步骤均为使用台式离心机,室温下离心。

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