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产品描述:

产品名称:口腔/咽拭子基因组DNA快速提取试剂盒

描述: 本试剂盒采用特制的进口DNA吸附柱和独特的缓冲液系统,特别适合于从口腔咽拭子中分离纯化基因组DNA。各种来源样品裂解消化处理后DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜(特别配备了Carrier RNA可以从体系中轻松捕获微量核酸),再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,将盐、物、蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的基因组DNA从硅基质膜上洗脱。纯化后的DNA无杂质和PCR抑制剂,可直接适用于PCR分析。
产品特点:
1、配备了Carrier RNA 用于充分收集特别微量DNA。
2、提取的DNA纯度高,质量稳定可靠,可适用于各种常规操作,包括PCR、酶切、测序、Southern 杂交等。
自备试剂:无水乙醇
产品信息:

使用方法: 提示:第一次使用前请先在 15ml 漂洗液 WB 中加入 60ml 无水乙醇,充分混匀, 加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入! 取样:取一根医用消毒棉签(手不要碰触脱脂棉部位),伸进口腔,紧靠脸颊内侧来回 刮拭 20 次(不时旋转棉棒),需充分接触口腔粘膜。 注意:避免用手触及棉签,采集前可先用清水轻轻漱口。为防止样本被食物或者饮料 污染,取样前 30 min 内应该避免进食或者饮水。 操作: 1、用剪刀将棉签部分从其杆上剪下,放入 2ml 离心管中,加入 400μl 裂解液 ML。 2、再加入 20μl 的蛋白酶 K (20mg/ml)溶液,立刻涡旋振荡充分混匀,56℃放置 30 min, 期间每 10 min 涡旋混匀 10 sec。 3、加入 400μl 结合液 CB,立刻涡旋振荡充分混匀,70℃放置 10 min(挤压去除拭子, 将尽可能多的裂解液转移至新的离心管中)。 如果拭子上细胞数量少,导致提取的基因组 DNA 产量过低, 可以在 400μl 结合液 CB 中加入 1μl Carrier RNA 储存溶液。 4、冷却后加 200μl 无水乙醇,立刻涡旋振荡充分混匀。简短离心以除去管盖内壁的液 滴,收集所有的液体到管底。(如果周围环境高于 25℃,乙醇需要冰上预冷后再加入) 5、将上一步混合物中加入一个吸附柱 AC 中(吸附柱放入收集管中),12,000rpm 离心 30-60 sec,倒掉收集管中的废液。 6、加入 500μl 抑制物去除液 IR,12,000rpm 离心 30 sec,弃废液。 7、加入 500μl 漂洗液 WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心 30 sec, 弃掉废液。 8、重复操作步骤 7。 9、将吸附柱 AC 放回空收集管中,12,000rpm 离心 2 min,将吸附柱置于室温放置数分 钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。 10、取出吸附柱 AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加 20-50μl 洗脱缓 冲液 EB(洗脱缓冲液事先在 65-70℃水浴中预热效果更好),室温放置 1 min, 12,000rpm 离心 1 min。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,室温放置 1 min, 12,000rpm 离 心 1 min 。 洗 脱 体 积 越 大 , 洗 脱 效 率 越 高 , 如 果 需 要 DNA 浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积不应少于 20μl,体积过 小降低 DNA 洗脱效率,减少 DNA 产量。(注意:DNA 产物应保存在-20℃,以防 DNA 降解) 注意:DNA 浓度及纯度检测 得到的基因组 DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有 关。回收得到的 DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。 DNA 应在 OD260 处有显著吸收峰,OD260 值为 1 相当于大约 50μg/ml 双链 DNA、 40μg/ml 单链 DNA。OD260/OD280比值应为 1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而 使用灭菌水比值会偏低,因为 pH 值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。

储存/保存方法: 室温保存,有效期12个月。

注意事项: 1、结合液 CB 或者抑制物去除液 IR 低温时可能出现析出和沉淀,可以在 37℃水浴几分 钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2、避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH 值变化。
3、Carrier RNA
(1)Carrier RNA 使用方法:如果起始处理量很少(口腔咽拭子上收集到的细胞很少), 我们推荐使用 Carrier RNA,如果预期有较大量 DNA 产量,用户可以根据需要选 择是否加入 Carrier RNA。使用时每个样品提取所需结合液 CB 中加入 1μl Carrier RNA 储存溶液,将结合液 CB 与 Carrier RNA 溶液充分颠倒混匀即可(结合液 CB 容 易起泡沫,请勿使用涡旋振荡混匀)。也可根据样品数量,在总共需要的结合液 CB 中 加入总共需要的 Carrier RNA 混匀备用。混合液在室温 24 小时内稳定。
(2)Carrier RNA 加入过多造成 DNA 洗脱液中 Carrier RNA 浓度过高,下游 PCR 反应可 能受干扰,加入过少可能并不能帮助提高 DNA 产量和 PCR 敏感度,因此加入量应 该在具体试验中调整以得到最佳效果。

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