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产品描述:

产品名称:唾液基因组DNA快速提取试剂盒

描述: 本试剂盒采用特制的进口DNA吸附柱和独特的缓冲液系统,特别适合于从唾液中分离纯化基因组DNA。各种来源样品裂解消化处理后DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜(特别配备了Carrier RNA可以从体系中轻松捕获微量核酸),再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,将盐、物、蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的基因组DNA从硅基质膜上洗脱。纯化后的DNA无杂质和PCR抑制剂,可直接适用于PCR分析。
产品特点:
1、不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
2、简单快速,单个样品操作一般可在20min内完成。
3、配备了Carrier RNA 用于充分收集特别微量DNA。
4、提取的DNA 纯度高,质量稳定可靠,可适用于各种常规操作,包括PCR、酶切、测序、Southern 杂交等。
自备试剂:无水乙醇
产品信息:

使用方法: 提示: 第一次使用前请先在 15ml 漂洗液 WB 中加入 60ml 无水乙醇,充分混匀, 加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入! 操作: 1、取 200μl 唾液放入 1.5ml 离心管中,加入 400μl 裂解液 ML。 2、再加入 20μl 的蛋白酶 K (20mg/ml)溶液,立刻涡旋振荡充分混匀,56℃放置 1 h,期 间每 10 min 涡旋混匀 10 sec。 3、加入 400μl 结合液 CB,立刻涡旋振荡充分混匀,70℃放置 10 min。 如果细胞数量少,导致提取的基因组 DNA 产量过低, 可以在 400μl 结合液 CB 中加入 1μl Carrier RNA 储存溶液。 4、冷却后加 200μl 无水乙醇,立刻涡旋振荡充分混匀。简短离心以除去管盖内壁的液 滴,收集所有的液体到管底。 如果周围环境高于 25℃,乙醇需要冰上预冷后再加入。 5、将上一步混合物加入一个吸附柱 AC 中,(吸附柱放入收集管中)12,000rpm 离心 30-60 sec,倒掉收集管中的废液。 6、加入 500μl 抑制物去除液 IR,12,000rpm 离心 30 sec,弃废液。 7、加入 500μl 漂洗液 WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心 30 sec, 弃掉废液。 8、重复操作步骤 7。 9、将吸附柱 AC 放回空收集管中,12,000rpm 离心 2 min,将吸附柱置于室温放置数分 钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。 10、取出吸附柱 AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加 10-20μl 洗脱 缓冲液 EB (洗脱缓冲液事先在 65℃水浴中预热效果更好),室温放置 1 min, 12,000rpm 离心 1 min。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,室温放置 1 min, 12,000rpm 离心 1 min。 (注意:DNA 产物应保存在-20℃,以防 DNA 降解)

储存/保存方法: 室温保存,有效期12个月。

注意事项: 1、结合液 CB 或者抑制物去除液 IR 低温时可能出现析出和沉淀,可以在 37℃水浴几分钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2、避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
3、结合液CB和抑制物去除液 IR 中含有刺激性化合物,操作时戴乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4、Carrier RNA :
(1)Carrier RNA 使用方法:如果起始处理量很少(唾液中收集到的细胞很少),我们推 荐使用 Carrier RNA,如果预期有较大量 DNA 产量,用户可以根据需要选择是否 加入 Carrier RNA。使用时在每个样品提取所需结合液 CB 中加入 1μl Carrier RNA 储存溶液,将结合液 CB 与 Carrier RNA 溶液充分颠倒混匀即可(结合液 CB 容易起 泡沫,请勿使用涡旋振荡混匀)。也可根据样品数量,在总共需要的结合液 CB 中加入总共需要的 Carrier RNA混匀备用。混合液在室温 24h 内稳定。
(2)Carrier RNA 加入过多造成 DNA 洗脱液中 Carrier RNA 浓度过高,下游 PCR 反应可能受干扰,加入过少可能并不能帮助提高 DNA 产量和 PCR 敏感度,因此加入量应该在具体试验中调整以得到最佳效果。

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